乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH,EC1.1.1.27)广泛存在于人和哺乳动物的肝脏、植物组织及微生物中,是生物体内重要的氧化还原催化剂之一。在许多有机体中,伴随着氧化型的辅酶I(NAD+)被还原成还原型辅酶Ⅰ(NADH)它可以可逆地将短链醇、芳香醇等催化氧化为其相应的羧基化合物。该酶应用广泛,目前已被应用于临床、化工及食品等领域,现在国内市场上的ADH产品几乎都源自于酒酿酵母,因其来源单一、高纯度ADH基本需要依靠进口,不能满足各领域的需求。所以开发不同来源、高纯度、低成本的ADH在理论和实践方面均具有十分重要的意义。猪作为一种常见的畜养农业动物,其遗传和生理特性与人类十分相似,正因如此,它被公认为是最有用且最全能的实验模式动物之一,对农业和人类疾病的研究具有十分重要的意义。本文通过对猪肝乙醇脱氢酶进行分离纯化及部分性质和功能基团的研究,旨在为ADH的获得提供一条新途径,为人类医学研究和以后的深入研究提供数据参考。研究结果如下:1.猪肝乙醇脱氢酶的分离纯化新鲜猪肝经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得了电泳纯的乙醇脱氢酶。纯化的结果显示:该酶比活力为1 622.33 U/mg,回收率为29.05%,纯化倍数为34.58。2.猪肝乙醇脱氢酶的性质研究猪肝乙醇脱氢酶的全酶分子质量约171.79 kD,亚基分子质量约43.68 kD,因此可推测该酶由4个相同亚基构成;最适反应温度和pH分别为45℃和10.0;在25~45℃及pH 7.5~9.0范围内稳定性较好;在最适条件下测得该酶对乙醇的Km值为19 mmol/L。氯仿、正丁醇、异丙醇、草酸、十二烷基硫酸钠(SDS)、Cu2+、Zn2+、Ag+对该酶的抑制作用最强,Mg2+对该酶有一定程度的激活作用;EDTA对该酶表现为双重作用,当浓度小于5 mmol/L时酶活有一定上升,当浓度高于5 mmol/L时,该酶酶活有一定下降趋势。3.猪肝乙醇脱氢酶功能基团的研究用特异性化学修饰剂对猪肝乙醇脱氢酶侧链基团进行选择性修饰结果表明:丝氨酸残基、半胱氨酸的巯基、色氨酸的吲哚基、甲硫氨酸的硫醚基为猪肝乙醇脱氢酶活性中心的必需基团,参与了该酶活性中心的构建;组氨酸的咪唑基可能是该酶活性中心的功能基团;而精氨酸胍基、赖氨酸ε-氨基、酪氨酸酚羟基与猪肝乙醇脱氢酶活性中心无直接关系,故不是猪肝乙醇脱氢酶活性中心的必需基团。