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目的基于对干眼疾病、胆碱能抗炎通路和针刺疗法的理论认识,结合分子生物学技术,通过检测干眼模型兔泪腺和角膜组织中相关因子表达情况,初步探讨针刺对干眼的抗炎作用机制,为针刺治疗干眼提供更多科学依据。方法实验一:以健康纯种的新西兰兔(48只)为实验对象,将其随机划分为空白组、模型组、假针刺组、针刺组、西药组、针药组,共6组,每组8只。空白组:皮下注射生理盐水1ml/kg/次,每日1次,连续35天;模型组:采取皮下注射的方式,分35天每日4次每次将氢溴酸东莨菪碱2.0mg/kg进行注射;假针刺组:造模同模型组,从第22天起用钝头针点刺丝竹空、睛明、攒竹、太阳、瞳子髎5个穴位,不刺入皮下,连续14天;西药组:造模同模型组,从第22天起双眼滴氟米龙滴眼液每次1滴,每日3次,连续14天;针刺组:造模同模型组,从第22天起电针治疗,穴位同假针刺组,留针15min,每日1次,连续14天;针药组:造模同模型组,治疗同西药组及针刺组,连续14天。于不同时间段观察各组CFS、BUT、SIT及泪液渗透压结果,用ELISA法检测各组泪腺中ACh、α7nAChR含量以及泪腺和角膜中IL-6含量的变化,运用Western blot法对实验泪腺样本的p38MAPK、p-p38MAPK等蛋白的表达水平进行检测,用RT-PCR法对泪腺样本内p38MAPK mRNA转录水平进行检测分析。实验二:以健康、纯种新西兰兔(36只)为实验对象,采取随机划分的方法将其分为空白组、模型组、针刺组、拮抗组、拮抗+西药组、拮抗+针刺组,共6组,每组6只。空白组、模型组、针刺组同实验一;拮抗组:造模同模型组,实验第22天耳缘静脉注射α-BGT一次,剂量为4.0ug/kg。拮抗+西药组:在同拮抗组处理的基础上,第22天起双眼滴氟米龙滴眼液,方法同实验一西药组,连续14天。拮抗+针刺组:在同拮抗组处理的基础上,第22天日起进行针刺治疗,方法同针刺组,连续14天。于不同时间段观察各组CFS、BUT、SIT及泪液渗透压结果,用ELISA法检测各组泪腺和角膜中IL-6含量的变化,运用Western blot法检测泪腺中p38MAPK的蛋白表达水平,RT-PCR方法检测泪腺内p38MAPK mRNA转录水平。结果(1)CFS结果显示:①实验第21天与实验前比较,除空白组之外的实验组均表现出CFS评分明显升高的情况(P<0.05);第35天、第21天实验结果的对比分析则肯定了针刺组、西药组、针药组等三个实验组的CFS评分呈现出比较典型的下降情形(P<0.05);②以空白组为比较对象,对实验第21天结果进行比较分析发现,模型组、假针刺组、针刺组、西药组、针药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组CFS评分显著升高(P<0.05)。③实验第35天,与空白组比较,模型组、假针刺组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组CFS评分显著升高(P<0.05);与模型组比较,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组CFS评分都呈现出典型的下降情形(P<0.05);相较于针刺组的实验数据,拮抗组表现出更高的CFS评分结果(P<0.05)。(2)BUT分析结果表明:①相较于实验前数据,实验第21天各实验组(不包含空白组)的BUT数据均呈现出明显的下降情况(P<0.05);比较第35天与第21天的实验数据可知,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组等的BUT数据呈现出显著的升高情形(P<0.05);②比较分析各组第21天的实验数据可知,相较于空白组,模型组、假针刺组、针刺组、西药组、针药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组BUT显著下降(P<0.05)。③比较分析各组第35天实验数据可知,相较于空白组,模型组、假针刺组、针刺组、西药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组BUT显著下降(P<0.05);同时基于模型组的实验数据进行比较分析,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组的BUT数据表现出显著的升高情形(P<0.05);基于针刺组的实验数据进行比较分析,可知拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组BUT显著降低(P<0.05)。(3)SIT结果显示:①实验第21天与实验前比较,除空白组外,其余各组SIT均显著下降(P<0.05);实验第35天与实验第21天比较,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组的SIT数据都呈现出明显的上升情形(P<0.05);②以空白组为基准对各组第21天实验数据进行对比分析,可知模型组、假针刺组、针刺组、西药组、针药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组的SIT数据均表现出明显的下降情形(P<0.05)。③以空白组为基准对各组第35天实验数据进行比对分析,可知模型组、假针刺组、西药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组的SIT数据均表现出明显的下降情形(P<0.05);相较于模型组,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组SIT显著上升(P<0.05);与针刺组比较,拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组SIT显著降低(P<0.05)。(4)泪液渗透压结果显示:①实验第0天各组兔之间相比,泪液渗透压无显著差异(P>0.05);实验第21天,模型组、假针刺组、针刺组、西药组、拮抗+西药组与本组实验第0天相比,泪液渗透压均显著升高(P<0.05),针药组也有所升高;实验第35天,针刺组与实验第21天相比,泪液渗透压降低趋势非常明显(P<0.05)。②第21天观察实验结果可知,相比于空白组,模型组、假针刺组、针刺组、西药组、拮抗+西药组等都能看到泪液渗透压明显升高的情况(P<0.05),针药组虽有所升高,但不具有统计学意义;各组和模型组对比,都没有明显的差异;③实验第35天,与空白组比较,模型组和假针刺组可见泪液渗透压明显升高(P<0.05)。与模型组比较,针刺组、西药组和针药组泪液渗透压均显著降低,差异性明显(P<0.05)。(5)泪腺中ACh、α7nAChR的含量泪腺组织中ACh含量:与空白组比较,模型组和假针刺组ACh含量明显降低(P<0.05);相较于模型组,针刺组、西药组和针药组的ACh含量均表现出显著的上升情形(P<0.05)。泪腺组织中α7nAChR含量:相较于空白组,模型组、假针刺组的α7nAChR含量表现出显著的下降情形(P<0.05);比较模型组的实验数据,针刺组、西药组和针药组α7nAChR含量明显上升(P<0.05)。(6)泪腺和角膜中IL-6的含量相较于空白组,模型组、假针刺组、西药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组泪腺中的IL-6含量均表现出显著的上升情形(P<0.05);模型组、假针刺组、针刺组、西药组、拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组角膜中IL-6均有显著提高的情况(P<0.05)。相较于模型组,发现假针刺组泪腺中IL-6明显提高,针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组泪腺中IL-6均有降低的现象(P<0.05);假针刺组、针刺组、西药组、针药组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组角膜的IL-6含量都表现出显著的下降情形(P<0.05);相较于针刺组,拮抗组、拮抗+西药组和拮抗+针刺组IL-6含量都表现出显著的上升情形(P<0.05)。(7)泪腺组织中p38MAPK及p-p38MAPK的蛋白表达水平与空白组比较,模型组、假针刺组的p38MAPK、p-p38MAPK数据都表现出显著的上升情形(P<0.05),而拮抗组及拮抗+针刺组p38MAPK数据表现出显著的上升情形(P<0.05);相较于模型组,西药组和针药结合组的p38MAPK、p-p38MAPK数据都表现出显著的下降情形(P<0.05),同时针刺组和拮抗+西药组p38MAPK蛋白表达量明显下降(P<0.05);与针刺组比较,拮抗组p38MAPK蛋白表达量明显上升(P<0.05)。(8)泪腺组织中p38MAPK的mRNA转录水平相较于空白组,模型组、拮抗组及拮抗+针刺组的p38MAPK mRNA数据都表现出显著的上升情形(P<0.05)。相较于模型组,针刺组、西药组、针药结合组和拮抗+西药组p38MAPK mRNA表达明显下降(P<0.05);与针刺组比较,拮抗组和拮抗+针刺组p38MAPK mRNA 表达明显上升(P<0.05)。结论针刺治疗能够减轻干眼模型兔角膜染色、延长泪膜破裂时间、提高泪液分泌量,降低泪液渗透压,增加泪腺中ACh和α7nAChR的含量,降低泪腺内p38MAPK蛋白与基因的表达,减少泪腺和角膜组织中IL-6的含量。针刺对干眼的抗炎作用机制可能与α7nAChR介导的p38MAPK信号通路密切相关。