【摘 要】
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目的:RRAD高甲基化导致基因表观遗传失活对多发性骨髓瘤的生物学特性的影响。方法:研究收集了2019年1月至2020年6月期间遵义医科大学附属医院血液内科收治的20例初诊多发性骨髓瘤患者和9例健康志愿者的骨髓标本。应用RT-qPCR的方法检测20例初诊多发性骨髓瘤患者、9例健康供者和人多发性骨髓瘤细胞株U266、H929、SKO-007中RRAD的转录水平;通过慢病毒转染在SKO-007和H929
【基金项目】
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国家自然科学基金（基金课题编号:81760026）；
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目的:RRAD高甲基化导致基因表观遗传失活对多发性骨髓瘤的生物学特性的影响。方法:研究收集了2019年1月至2020年6月期间遵义医科大学附属医院血液内科收治的20例初诊多发性骨髓瘤患者和9例健康志愿者的骨髓标本。应用RT-qPCR的方法检测20例初诊多发性骨髓瘤患者、9例健康供者和人多发性骨髓瘤细胞株U266、H929、SKO-007中RRAD的转录水平;通过慢病毒转染在SKO-007和H929中构建RRAD过表达细胞系,用流式细胞术、RT-qPCR和Western Blot验证其过表达的效率;采用CCK8法研究RRAD对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞凋亡。用地西他滨处理U266、H929、SKO-007细胞系,通过RT-qPCR检测RRAD基因表达水平的变化;采用CCK8检测地西他滨处理对U266、H929、SKO-007细胞系增殖的影响;采用流式细胞术检测地西他滨处理对U266、H929、SKO-007细胞系凋亡和周期的影响;MSP法检测U266、H929、SKO-007细胞系RRAD甲基化情况。结果:与9例健康供者相比,RRAD在20例初诊多发性骨髓瘤患者中表达水平显著降低（0.52±0.63 Vs 1.16±0.63,P=0.017）;与9例健康供者相比,多发性骨髓瘤细胞株U266、H929、SKO-007中RRAD的表达水平也明显降低,结果分别为U266（0.0003±0.00004 Vs 1.16±0.63,P=0.012）、H929（0.0017±0.00009Vs 1.16±0.63,P=0.012）、SKO-007（0.004±0.00027 Vs 1.16±0.63,P=0.012）;ROC曲线结果表明RRAD表达水平诊断多发性骨髓瘤的最佳临界点是0.59,敏感度为75%、特异度88.89%、约登指数为0.639、AUC值为0.792（P<0.001）。RRAD基因过表达可促进SKO-007细胞凋亡（9.68±3.92 Vs 3.21±0.35,P=0.046）。地西他滨处理U266、H929、SKO-007后,各细胞系的RRAD表达量明显升高,结果分别为U266（25.00±4.12 Vs 1.02±10.14,P=0.001）、H929（6.50±1.37Vs1±0.0002,P=0.02）、SKO-007（4.24±1.07Vs1.02±0.17,P=0.035）。与对照组进行比较,地西他滨处理能明显抑制各骨髓瘤细胞系的增殖,且抑制作用呈现剂量依赖性;可促进U266、H929、SKO-007细胞凋亡,结果分别为U266（12.12±1.23 Vs 5.62±1.89,P=0.003）、H929（11.98±1.33Vs8.69±0.84,P=0.03）、SKO-007（12.77±2.66Vs7.4±0.92,P=0.023）,可阻滞细胞周期为S期或G2期。此外,经地西他滨处理后,可观察到SKO-007细胞RRAD甲基化水平显著下降。结论:1.与健康供者相比较,RRAD在多发性骨髓瘤患者中呈低表达状态;2.与健康供者相比较,RRAD在多发性骨髓瘤细胞系中也呈低表达状态;3.RRAD过表达可以促进MM细胞凋亡;4.去甲基化药物地西他滨能上调多发性骨髓瘤细胞系中RRAD的表达并抑制细胞增殖、促进细胞凋亡;5.RRAD在多发性骨髓瘤中的高甲基化导致表观遗传学的失活使RRAD的表达量降低。
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