D氨基酸氧化酶广泛用于D-氨基酸的定性定量分析、生物传感器、L-氨基酸和α-酮酸的生产,而过氧化氢酶可以催化反应生产过程中产生的过氧化氢从而促进反应进行。固定化酶对酶的催化反应有一定影响,并且双固定酶的协同作用能提高反应速率。本文先对DAAO-ELP、CAT-ELP进行表达纯化,待用于实验的研究。然后,对蛋白进行固定化研究。发现吸附DAAO-ELP在溶液中具有一定的稳定性,而分散性也得以提高,并进行催化反应,测得比酶活比游离DAAO-ELP高,是其1.7倍之多且酶活持久些。而对于交联DAAO-ELP,其比酶活是游离DAAO-ELP的1.3倍。另外,通过化学交联,固定化DAAO-ELP和固定化CAT-ELP一起作用对酶活有明显的提高,其比酶活是没有加CAT-ELP催化的比酶活的4倍之余。不同比例的两固定酶作用得到的效果也不同,当固定化DAAO-ELP和固定化CAT-ELP的比为1：2时,比酶活最高,是固定化DAAO-ELP单独作用时的五倍还多,这也说明DAAO-ELP和CAT-ELP都固定到CNT上。运用红外、圆二、TEM等一些仪器对纯化CNT、氧化CNT及固定化酶进行表征。红外、XPS、紫外图谱中反应出载体上有酶的存在。CD图谱分析了固定前后的酶的二级结构变化,从a螺旋的含量80%以上保留,可初步确保酶活。另外,高分辨透射电镜可观察固定酶和载体的形态和情况。拉曼图谱说明固定前后的微观结构变化,固定化酶的无序度增强,缺陷度有提高。