瘢痕疙瘩是多种生长因子刺激成纤维细胞、血管内皮细胞等修复细胞增殖并合成大量细胞外基质的结果。TGF-β在瘢痕疙瘩的形成过程中发挥着关键作用。 TGF-β与细胞膜上的TGF-β受体结合后，经过其在细胞内的信号介导子--SMADs蛋白家族，将TGF-β的刺激信号传入核内调控基因转录。这就是TGF-β／SMADs信号转导通路。但TGF-β如何影响SMADs、以何种方式影响哪些靶基因等问题尚远未研究清楚。特别是，在TGF-β／SMADs信号传导通路与瘢痕疙瘩的形成的关系研究方面，有关的报道少见，作者在研究过程中仅检索到一篇文献（Chin GS，et al．P．R．S．2001；108；423）。因此，有必要对此进行研究。 本文对KFB胞膜TGF-βⅠ、Ⅱ受体和TGF-β／SMADs信号传导通路中的SMAD3、7信号介导子的表达及其调控机制进行了研究。并利用反义寡 第四军医大学傅士学位论文 核苦酸掺入技术，对 TGF－5／SMADS信号通路阻断后的 KFB的增殖与胶原 合成的影响进行了初步研究。 首先，利用免疫组织化学（SABC法）和图像分析的方法，观察了 TGF． PI、11型受体在体外培养的正常皮肤成纤维细胞（NFB）、KFB中的表达。 结果发现，两种受体在KFB中染色的阳性着色（棕黄色）均深于NFB细胞 （P＜0．05）；当受到 TGF－日；刺激后，KFB阳性着色深于未受刺激的 K厂以P＜0．05)。提示吓B中的 TGF－6I、11型受体高表达，而且这种表达 可因配体的刺激而上调。 其次，采用逆转录PCR、Western蛋白印迹杂交、免疫荧光等技术， 对Smad3、7mRNA及其蛋白在KFB中的表达和调控机制进行了研究。结果 发现：Smad3mRNA及其蛋白在NFB和KFB中的表达水平并无明显差别， 但SMAD3蛋白在KFB核内的荧光强度强于NFB。TGF－pl刺激KFB后，Smad3 ITutN A表达随K卜日 剂量增加（O，5，n，500＊m。1几）和时间的延续 (1，2，4，24，d卜而降低，呈剂量依赖性和时间依赖性。枷d7m趴A 在 5 pmol／L TGF－P 作用 90。in就上调到对照组的近 3倍，并延续到 24h 才恢复至大约正常水平。SWhD3表达在兀F－p 作用24h后下降了70％， 而SAfD7在TGF－日；刺激2小时就达到最高值，说明Smad7 aRNA表达对TGF－ 日；的刺激更为敏感而反应迅速。用蛋白合成阻断剂CHX阻断KFB的蛋白 合成后，Smad3 mRNA表达下调明显，说明Smad3 mRNA表达具有蛋白合成 依赖性，而Smad7 mRNA表达不受影响，呈非蛋白合成依赖性，即 Smad7 可能是SWDS的直接靶基因。 再次，对SMAD3、7蛋白在KFB中的空间分布进行的研究发现：当KFB 受到TGF－p 刺激后，SMAD3由胞浆向核内转位，具有剂量和时间信赖性。 SMAD7在KFB未受刺激时表达很弱，受TGF－日；刺激后，迅速从在胞浆 聚集。 4 第四军医大学博士学位论文 在研究 fNfN－Y对 TGF－e／SM－AM－Ak信号通路的影响时，我们发现， 500U／ml I刚－v旨使Sm叨7 InRNA在作用30ruin 后以非蛋白合成信赖性 方式上调到刺激前水平的8倍多，并持续达sh之久。IFN－Y还能抑制TGF－ e；引起的SMAD3向核内转位。说明Iry－Y通过直接促进SMAD7表达， 抑制TGF－日／ShaD信号转导过程。 最后，我们将 Smad3、Smad4反义寡核苦酸（AS03，AS04）掺入 KFB 中，以直接阻断TGF－p；’SMADS信号转导通路，结果发现，AS03、AS04均 能使 MTT反应 A值下降（P＜0．01），并使们－脯氨酸的掺入量降低（P＜0．05）， 说明 AS03或 AS04能阻断 TGF日／SMAD信号通路，并抑制 KF增殖与胶原 合成。 综上所述，本研究得出如下结论： 1．TGF－pl、11型受体在 KFB高表达并具有配体依赖性。 2．yB内可能存在较高水平的磷酸化SMAD3。 3．KFB存在着与其它细胞类似的 TGF－日／SMDS信号传递过程和调 控机制。 4．在KFB中，IFN－Y以非蛋白合成信赖的方式迅速上调SMAD7的 表达而抑制TG卜p／刁MDS通路信号转导。 5．Smad3、Smad4反义寡核苦酸能阻断TGF－D／SMAD信号通路并抑制 KFB的增殖和胶原合成。 在本研究的基础上，结合目前有关细胞信号转导的进展