肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆、表达纯化以及生物活性的初步研究

来源 :中国人民解放军空军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caacmis487
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肿瘤坏死因子相关配体属于肿瘤坏死因子(TNF)家族,是继TNFα,FasL之后新发现的具有介导细胞凋亡能力的存在于细胞表面的细胞因子配体,在多种组织和细胞中广泛表达。和TNF家族的其他成员不同的是,TRAIL在体内仅以膜结合型存在。体外实验表明,无论膜结合型的还是可溶型的TRAIL,都能迅速诱导表达TRAIL特异受体的细胞发生凋亡。近年来的研究表明,TRAIL在体内、体外均有很强的肿瘤特异性杀伤作用,是一个具有治疗恶性肿瘤潜在应用价值的基因工程药物。我们以中国人外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增TRAIL的胞外区(sTRAIL),插入原核表达载体,转化大肠杆菌后,成功地表达了sTRAIL蛋 第四军医大学博士学位论文白,并进行了纯化和初步的功能性研究,现将结果报告如下。1.以正常人外周血淋巴细胞总RNA为模板,成功地扩增了 TRAIL的胞外区CDNA,并克隆到原核表达载体中2.运用PCR技术改造所获得的CDNA片断,针对所用表达载体 在 SIRAIn CDNA片断 5’和 3’端分别设计并引人两对酶切位 点 EcORI和 BalnHI…BV220载体)及 Ndel和 BalnHI (PRSE八载体),构建了 2个 SIRAIL原核表达载体: pBV220lSIRAIL,pRSET-AjTRAIL3.分别通过用温度和IPTG诱导,成功地使2个表达载体在原核 系统中高效表达并纯化。免疫印迹杂交表明表达的蛋白具有 T巴利亚抗原性。4.MTI’法测试表明:体外肿瘤细胞杀伤实或明该蛋白可以有 效地杀伤肿瘤细胞,对正常人体细胞无毒副作用。5.用成骨肉瘤细胞系(SOSP-9607及 SOSP-9901)制作荷瘤裸 鼠模型,s侧IL蛋白可以有效的抑制荷瘤裸鼠体内2种实体 瘤的生长,抑制率分别达到61%及63.3%。
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