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目的：构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。
方法：1．以pUC57-VH、pAT4-CH为模板，通过重叠延伸PCR方法，将G250重链的可变区和恒定区基因序列连接并在两端加入BamHI、XhoI酶切位点，切胶回收PCR产物，酶切后克隆进pUC19的相应位点，构建pUC19-GH并测序。2．质粒pUC19-GH经BamHI/XhoI双酶切，得到GH片段，连接到带有IRES（内部核糖体进入位点）的pCLON12质粒相应位点，构建pCLON12-GH并测序。3.以pUC57-GL为底物，EcoR I/Sal I酶切GL片段，克隆进pUC19的相应位点，构建pUC19-GL并测序。4．将pUC19-GL用EcoR I/SalI酶切，克隆入pCLON12-IRES-GH中，构建pCLON12-GL-IRES-GH并测序。5．质粒pCLON12-GL-IRES-GH经EcoRI/XhoI双酶切，回收含有GL-IRES-GH片段，插入pDC315载体的EcoRI/SalI位点，构建为pDC315-GL-IRES-GH即pDC315-G250，质粒pDC315-G250带有CMV启动子+G250+SV40的表达框，送测序。6．将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染293细胞，9-12天后出现病毒空斑。病毒小量扩增后提取重组腺病毒的DNA， PCR鉴定正确者即为增殖缺陷型腺病毒AdDC315-G250。
结果：1.PCR、测序鉴定表明pUC19-GH构建成功。2.PCR、测序鉴定pUC19-GL构建成功。3．酶切、测序鉴定pCLON12-GH构建成功。4．酶切、测序鉴定表明pCLON12-GL-IRES-GH构建成功。5．酶切、测序鉴定表明pDC315-G250构建成功。6.PCR鉴定表明病毒AdDC315-G250包含目的基因，病毒包装成功。
结论：成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷腺病毒。