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目的:探讨鸟苷酸交换因子Dock1对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响及相关的分子机制。方法:用阴性对照慢病毒(NC shRNA)和靶向Dock1基因沉默慢病毒(Dock1 shRNA)分别感染大鼠H9C2心肌细胞,用嘌呤霉素来筛选并建立慢病毒感染有效的细胞株。再用重组人Dock1过表达质粒(hDock1-pCXN2-Flag)和重组真核空载质粒(pCXN2-Flag)分别随机转染Dock1沉默细胞。将上述干预后的三组细胞各备两份,并随机从中取一份进行缺氧/复氧(H/R)干预。将实验细胞分为6组:Ⅰ:阴性对照组(NC shRNA);Ⅱ:Dock1沉默+空质粒组(Dock1 shRNA);Ⅲ:Dock1沉默+人Dock1过表达组(Dock1 shRNA+hDock1);Ⅳ:阴性对照+缺氧/复氧组(NC shRNA+H/R)Ⅴ:Dock1沉默+空质粒+缺氧/复氧组(Dock1 shRNA+H/R);Ⅵ:Dock1沉默+人Dock1过表达+缺氧/复氧组(Dock1 shRNA+hDock1+H/R)。采用RT-PCR检测Dock1 mRNA表达水平,Western blot法检测Dock1、AKT、p-AKT、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和Flag蛋白表达水平,MTT法检测各组增殖率,流式细胞术(FCM)检测各组凋亡率。结果:细胞的慢病毒感染率达80%。与阴性对照组比较,Dock1沉默干预组Dock1 mRNA、Dock1蛋白、p-AKT蛋白、p-ERK1/2蛋白、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均显著降低,而Bax蛋白和细胞凋亡率均显著增加。与Dock1沉默组比较,Dock1沉默+过表达组存在human Dock1mRNA表达,而rat Dock1 mRNA表达差异无统计学意义,Dock1蛋白、p-AKT蛋白、p-ERK1/2蛋白、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均显著增加,Bax蛋白和细胞凋亡率均显著降低。与对应正常条件培养各组比较,H/R干预各组的Dock1 mRNA、Dock1蛋白、p-AKT蛋白、p-ERK1/2蛋白、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均显著降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均显著增加(所有P<0.05)。结论:在体外H9C2心肌细胞实验中:成功实现缺氧/复氧(缺血/再灌注)损伤模型;沉默Dock1基因可加重模型所致的凋亡增加和增殖降低,而过表达Dock1基因可逆复模型所致的上述损伤。因而得出结论:Dock1能抑制H9C2心肌细胞的凋亡、协助其增殖,且和Dock1的表达水平呈正相关关系,这种作用是通过p-AKT、p-ERK1/2、Bcl-2家族介导调控水平而实现的。