【摘 要】
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乳酸菌具有调节肠道微生态平衡、增强人体免疫力、降低胆固醇等多种功能作用,长期以来应用于发酵食品和乳制品当中,是公认的安全可食用的菌株。但是近年来也有研究报道某些来源的乳酸菌也会产生安全性问题,如发酵后会产生亚硝酸盐、生物胺类、吲哚等有毒害作用的代谢产物,这些产物在体内蓄积过多,会危害健康。本实验室从桑叶中分离到一株高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌（γ-aminobutyric acid,GABA）,命名
【基金项目】
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国家农业部公益性行业（农业）科研专项（201403064）; 国家现代农业产业技术体系建设专项（CARS-22）
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乳酸菌具有调节肠道微生态平衡、增强人体免疫力、降低胆固醇等多种功能作用,长期以来应用于发酵食品和乳制品当中,是公认的安全可食用的菌株。但是近年来也有研究报道某些来源的乳酸菌也会产生安全性问题,如发酵后会产生亚硝酸盐、生物胺类、吲哚等有毒害作用的代谢产物,这些产物在体内蓄积过多,会危害健康。本实验室从桑叶中分离到一株高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌（γ-aminobutyric acid,GABA）,命名为SG-5,该菌株GABA产量为7.24g/L,具有显著抑制血管紧张素转移酶能力。为了明确其对动物的安全性,本研究首先分析菌株SG-5的生物特性,然后从动物毒理学实验、有害代谢产物、菌株耐药性三个方面来评价SG-5的安全性,最后应用高通量测序技术分析其对大鼠肠道微生物的影响,为其开发应用提供理论依据,研究结果如下:1.菌株SG-5的生物特性分析。对SG-5的耐胆盐能力、耐酸碱稳定性和耐热性进行研究,结果证明菌株在0.8%胆盐浓度下的耐受力为39.19%,低于0.8%胆盐浓度下均能存活,具有较强的耐胆盐能力;SG-5在Na Cl质量浓度低于8%的条件下均能存活,在8.0%Na Cl浓度的耐受力为17.73%;在酸性条件下p H>3.0时SG-5生长良好,碱性条件下p H0.05）。未得到最小观察有害作用剂量（LOAEL）和未观察到有害作用剂量（NOAEL）,说明SG-5的NOAEL>8×1012CFU/kg。对大鼠脏器进行细菌易位检查,没有易位现象生物发生。实验结果初步表明SG-5为安全性菌株。3.菌株SG-5有害代谢产物评价试验。细菌在生长过程中会出现某些有害代谢产物,用血平板对菌株SG-5进行溶血实验,没有溶血现象;用氨基脱羧酶培养基培养SG-5菌株,检测SG-5是否产生氨基脱羧酶,结果为阴性,说明SG-5不产生氨基脱羧酶;用蛋白胨水培养基培养菌株检验是否具有分解色氨酸的能力,试验结果为阴性;同时用硝酸还原酶试剂盒检测菌液中是否含有硝基还原酶,结果表明不产生硝基还原酶。4.菌株SG-5耐药性分析。使用KB药敏纸片琼脂扩散法检测SG-5对哌拉西林等12种抗生素是否具有抗性,并提取SG-5的质粒,检测是否含有耐药性基因,实验结果显示SG-5对哌拉西林、阿莫西林、四环素、氯霉素、罗红霉素、青霉素等6种抗生素敏感;对利福平、红霉素中度敏感;对庆大霉素、卡那霉素、链霉素、环丙沙星等7种抗生素耐药,菌株不含有耐药性质粒。5.菌株SG-5对肠道微生物的影响。SD大鼠28天喂养实验结束时,收集大鼠的盲肠粪便,采用宏基因组学研究方法,利用高通量测序技术测定肠道的微生物菌落组成,进行OUT及丰度等分析。结果表明中剂量灌胃组(8×1010CFU/kg)盲肠微生物物种丰度、多样性及乳酸菌含量大大增加,有害菌群减少。综上所述,菌株SG-5为一株安全性菌株,适宜的剂量范围能够提高盲肠微生物的丰度及多样性。
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