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PTIP(也称为PAXIP1)蛋白全称为Pax2 transactivation domain-interacting protein,含有6个(3对)BRCT结构域以及一段长的poly-Q区域。已有的实验证据表明PTIP蛋白可以通过募集多种蛋白质参与不同的生命过程,其中包括与组蛋白修饰相关的蛋白复合体如组蛋白甲基转移酶(HMTs) ALR和MLL3/MLL4、组蛋白去甲基化酶UTX等相互作用参与组蛋白修饰,以及与DNA损伤修复蛋白复合体相互作用参与DNA损伤应答过程。实验表明,Ptip基因敲除的小鼠表现出发育滞后以及早期胚胎致死的现象,提示Ptip基因对于动物的生长发育是极其重要的。然而对于PTIP蛋白参与发育过程的详细调控机制还知之甚少。 实验室前期的研究结果表明果蝇ptip(dptip)是小鼠Ptip的直系同源基因,功能上非常保守,同时我们也有初步的结果表明dptip对果蝇的发育至关重要。鉴于其操作简便等优点果蝇成为我们研究PTIP蛋白在体功能的极佳模型。本文将利用果蝇遗传学的优势在果蝇成虫盘中研究PTIP蛋白的在体功能,而果蝇成虫盘是研究许多发育相关的信号通路例如Hh,Dpp等信号通路的优秀经典模型。 本文着重于观察dptip突变体果蝇翅膀成虫盘的形态学变化。首先,通过原位杂交实验我们发现dptip基因在dptip合子突变体果蝇的翅膀成虫盘中表达水平确实显著下调,在分子水平证实了突变体果蝇的翅膀成虫盘中aptip几乎没有表达。随后,我们以定量的方式认真统计了dptip合子突变体翅膀成虫盘的数量和大小,我们发现仅有大约30%的突变体果蝇含有可见的翅膀成虫盘。通过面积测量和分布统计发现,dptip合子突变体果蝇的翅膀成虫盘显著小于野生型,并且形态严重异常。这些结果与之前文献所报道的PTIP蛋白是Trithorax蛋白复合物的成员相一致,因为dptip基因突变所导致的表型与ash1/2(absent, small and homioticdiscs1/2)基因突变相似,而它们所编码的蛋白是Trithorax复合物的核心组分。接着,我们发现Caspase3在aptip合子突变体果蝇的翅膀成虫盘中是高度激活的,说明dptip基因具体抑制凋亡的功能,这在某种程度上与PTIP的DNA损伤修复功能相吻合。最后,我们选取了en,hh,dpp,ci这几个与翅膀A/P图式形成密切相关的基因研究PTIP对基因激活的作用,我们发现这些基因在dptip合子突变体果蝇的翅膀成虫盘中的表达图式都受到了严重影响,这表现出了PTIP蛋白对发育相关的基因广泛的激活和调控功能。 综上所述,这些在体的实验数据表明PTIP蛋白对于激活许多重要的发育基因是必不可少的,或许是通过表观遗传的调控机制,同时也对细胞生长和(或)分化也起着重要作用。PTIP蛋白抑制凋亡的功能或许可以解释果蝇和小鼠PTIP基因突变致死的现象。我们目前最为感兴趣的是dPTIP是以一种直接的方式还是以间接地调控发育相关基因的方式表现出其抑制凋亡的功能,这将是我们未来研究的重点。总而言之,我们的实验结果有助于我们更好地理解PTIP蛋白的在体功能。