目前全世界约有一亿五千万糖尿病患者.其中Ⅰ型糖尿病患者和部分Ⅱ型糖尿病患者可以通过胰岛移植的方法进行治疗.但是目前移植治疗的最主要困难是胰岛来源少.如何得到足够数量的胰岛细胞成为相关研究的热点问题.该文利用已有的胰腺分化关键基因的启动子(Nestin,HES1,Pdxl,Rat Insulin1,Human Insulin等启动子)及其他细胞特异性启动子(GFAP启动子),带动报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达,电转入ES细胞,对ES细胞进行系列标记.并利用RT-PCR,免疫组化等方法对转基因ES细胞进行鉴定,筛选出GFP表达与相应内源基因表达相吻合的转基因ES细胞克隆.这些转基因ES细胞可以用于追踪ES细胞向胰岛β细胞的详细分化过程,实时监测ES细胞分化过程中的基因表达变化情况.可以用于分选表达上述特定基因的单一细胞群体,便于研究其基因表达谱等情况.也可以用于高通量筛选富集ES细胞向胰岛β细胞及其前体细胞分化的诱导培养条件.该文还对小分子化合物对于ES细胞向胰岛β细胞分化的影响进行了尝试性的探索.发现dBcAMP和Forskolin可以抑制ES细胞向外胚层细胞的分化,强烈抑制其向中胚层的分化,并促进其向内胚层的分化,可能会促进ES细胞向胰岛β细胞的分化.该文对于转基因促进ES细胞向胰岛β细胞的分化也进行了尝试性研究.我们将Pax4,Pdx1,Pten,dnPten (Dominant-negative的Pten突变体,抑制内源Pten的活性)等基因导入ES细胞,获得了强表达Pdx1的转基因ES细胞.该研究从ES细胞特异性标记,外加诱导因子,以及转基因表达胰腺发育分化相关基因三个方面对促进ES细胞向胰岛β细胞的定向分化进行了探索,研究结果对于改进ES细胞向胰岛β细胞分化的诱导培养条件,搞清这一体外定向分化的分子机制,提高这一分化的效率可能具有一定的帮助.