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目的:探究三种由全基因组外显子测序筛选所得的PSIS可能致病基因体外的功能验证,为垂体柄中断综合征病因研究的体内实验提供理论依据。方法:利用全基因组外显子测序技术对1例合并中枢性性早熟的垂体柄中断综合征患儿及父母(一共三例,父母为对照)进行基因,经过对比和深入分析,初步确定可能的致病基因。针对上述的基因,首先进行确认,进一步设计小干扰RNA(siRNA)分别转染至GH3细胞内,每种基因均设置实验纸阴性对照组(Negative Control Group,NC)、空白对照组(Blank Group)。通过RT-PCR筛选出各基因最佳的siRNA敲低序列以用于复筛,Western Blot(WB)复筛各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表达,以确定目标基因进行下一步研究。依次运用CCK-8(cell counting kit-8)检测细胞增殖能力及形态,细胞划痕实验检测细胞迁移,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌功能,WB检测垂体特异性转录因子-1(pit-oct-uncclass 1 homeobox 1,POU1F1)和垂体特异性转录因子祖先蛋白(homeoboxproteinprophetofPit-1,PROP1)表达水平。结果:1)经过分析患者基因结果,并与父母比对,发现有三个基因有明显突变,分别是细胞分化周期蛋白27(cell division cycle protein 27,CDC27)、神经纤维瘤病1型(neurofibromatosis type 1,NF1)、X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9(ubiquitin specific peptidase 9,X-Linked,USP9X);2)CDC27 在 siRNA-117 和siRNA-1968序列时能够达到稳定的沉默效率,并且在mRNA及蛋白两个水平上均能够被敲低,NF1和UPS9X仅能在mRNA水平实现敲低而没有实现蛋白水平的敲低,无法进行后续实验;3)CDC27沉默对于细胞的增殖及形态无明显影响(P>0.05);4)CDC27沉默能够明显抑制细胞的迁移能力(P<0.05);5)CDC27能够明显下调POU1F1与PROP1的表达水平(P<0.05);6)CDC27沉默能够明显抑制细胞分泌生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)分泌(P<0.05),对促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)分泌的影响无明显差异(P>0.05)。结论:利用全基因组外显子测序技术对该例中枢性性早熟的PSIS患者的测序分析发现三个可能的致病基因,其中CDC27沉默可以抑制GH3细胞的迁移及其生长激素、泌乳素的分泌和下调POU1F1与PROP1的表达。