基于核磁共振(NMR)代谢组学可直接测定生物体液及组织等样本中多种代谢物,但是,一些微量代谢物因浓度低于NMR检测限或者信号被遮挡,而无法被准确鉴定。然而,一些微量代谢物却被认为与特定的疾病高度相关[1]。因此,微量代谢物的准确鉴定是代谢组学研究的必要内容,这直接影响代谢组学研究生物化学分析结果的可靠性。本研究采用高效液相色谱(HPLC)及NMR的离线联用技术,建立了鉴定复杂生物体系中微量代谢物的有效方法。该方法首先使用HPLC技术对样本中代谢物进行分离及分段富集,并采集各个碎片1H NMR图及2DNMR图,借助chenomx nmr suite软件、HMDB数据库及文献进行代谢物的鉴定(图1及图2)。应用该分析方法,我们从SD大鼠尿液和粪便水提物中分别鉴定了71和64种代谢物,其中28种及36种在未分离富集前因量少而不能被识别。本研究表明,HPLC与NMR技术联合使用,可提高复杂生物体系中代谢物鉴定准确程度,将有望成为未知生物标志物鉴定的有效手段。