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目的探讨HT-29结肠癌细胞系经细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ及脂多糖(LPS)刺激后,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白2(MD2)及人β防御素2(HBD2)在转录和蛋白水平的表达变化及其与NF-κB激活的关系。方法 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI 1640、TNF-α(20 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)、LPS(50ng/mL)、TNF-α(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)干预。ELISA测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平,RT-PCR检测各组细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA水平,免疫印迹检测各组细胞TLR4和NF-κB蛋白表达。结果细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达高于对照组(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(P<0.01)。细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和MD2 mRNA的水平(P<0.01);HBD2 mRNA水平在IL-1β,LPS协同TNF-α、IL-1β、IFN-γ组升高(P<0.05)。细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和NF-κB蛋白表达(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,NF-κB蛋白表达进一步增高(P<0.05)。结论细胞因子(TNF-α、IL-1β、IFN-γ)能够增加肠上皮细胞(IEC)的TLR4和MD2表达、增强其对LPS的反应性,造成IEC对常驻菌的过度反应,从而启动或加重肠道炎症;炎症信号(IL-1β、LPS+TNF-α、LPS+IFN-γ)刺激可诱导IEC的HBD2基因转录表达,增强肠道获得性免疫反应,影响肠道炎症进程。