目的 建立成人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系.方法 取正常成人骨髓5 ml,用Percoll分离液(密度1.073 g/ml)经密度梯度离心法分离得到单个核细胞,以2×105个细胞/cm2的密度接种于含10%新生牛血清的LG-DMEM培养液.经培养、扩增后,应用倒置相差显微镜观察其形态,MTT法测定生长曲线.流式细胞仪行细胞表面抗原及细胞周期的检测,并在透射电镜下观察其超微结构.结果 培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一,为梭彤或纺锤形的成纤维细胞样外观,生长曲线示其增殖能力强.流式细胞仪检测显示有90%以上的细胞处于GO/G1期,表面标记物中CD44表达阳性,而造血细胞表面标志CD3、CD4、CD7、CD13、CD14、CD15、CD19、CD22、CD33、CD34、CD45和与移植排斥发生密切相关的HLA-DR表达阴性.超微结构显示细胞内有丰富的粗面内质网,细胞器发达.结论 所建立的分离和培养方法可获取骨髓粘附细胞中一组独特的细胞群,具有MSCs的生物学特性,可作为组织工程中的种子细胞。