【摘 要】
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胰岛素降解酶是维持体内糖代谢平衡和蛋白质稳态的关键蛋白质,也是2型糖尿病及阿尔茨海默病临床药物的重要靶点。本研究构建了野生型鼠源胰岛素降解酶的大肠杆菌ppSUMO表达系统,并完成了鼠源胰岛素降解酶的表达纯化及功能测定。采用ppSUMO表达系统得到的融合蛋白具有组蛋白标签和ULP1酶切位点,通过ULP1酶对亲和纯化得到的融合蛋白进行酶切,可以获得无标签胰岛素降解酶。另外,根据胰岛素降解酶的理化性质(如等电点、相对分子质量),采用离子交换层析和凝胶过滤层析两种纯化方法,可完成蛋白质的纯化。纯化所获得的野生型胰
【基金项目】
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上海市科学技术委员会国际合作计划项目(19410711000),国家级大学生创新创业训练项目(105-03-0178079)。
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胰岛素降解酶是维持体内糖代谢平衡和蛋白质稳态的关键蛋白质,也是2型糖尿病及阿尔茨海默病临床药物的重要靶点。本研究构建了野生型鼠源胰岛素降解酶的大肠杆菌ppSUMO表达系统,并完成了鼠源胰岛素降解酶的表达纯化及功能测定。采用ppSUMO表达系统得到的融合蛋白具有组蛋白标签和ULP1酶切位点,通过ULP1酶对亲和纯化得到的融合蛋白进行酶切,可以获得无标签胰岛素降解酶。另外,根据胰岛素降解酶的理化性质(如等电点、相对分子质量),采用离子交换层析和凝胶过滤层析两种纯化方法,可完成蛋白质的纯化。纯化所获得的野生型胰
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