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[目的]构建以pUC19质粒为基础可利用Xcm Ⅰ内切酶制备的T载体.[方法]化学合成2条含有双Xcm Ⅰ酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入pUC19质粒的HindⅢ和BamH1位点之间,通过Xcm Ⅰ酶切后得到一个线性化的带有3末端突出一个T碱基的T载体.[结果]经TA克隆验证,制备的pUC19-HB-T载体对PCR产物的克隆率达到95%以上.[结论]所构建的pUC19-HB-T载体可用于PCR产物的克隆、测序及后续分子生物学操作.