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本文建立了一种同位素稀释-高效液相色谱串联质谱法定量检测婴幼儿配方奶粉中酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides，CPPs）含量的方法。CPPs原料经Q Exactive Orbitrap 扫描，Uniprot蛋白质数据库初步确定原料中所含肽段，根据质谱响应以及加标回收率等方法学验证实验进一步筛选确定CPPs的特征肽段。样品经过前处理后，采用ACQUITY UPLC BEH 300 C18色谱柱分离，多反应离子监测模式定量测定其中的CPPs特征肽。根据CPPs原料与CPPs特征肽含量的折算系数，从而确定出样品中CPPs的含量。方法学验证结果表明，本文所建立的方法在10-150 mg/100 g范围内线性关系良好，相关系数0.999。在高、中、低三水平加标实验中，回收率在96.2%-100.2%之间，日间重现性在5.3%-7.8%之间。方法定量限为1 mg/100g，可以满足婴幼儿配方奶粉中不同CPPs含量水平的定量要求。