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摘 要：头孢氢氨苄高分子聚合物的检查方法在国外医学中还没有确定，这主要是由于高分子聚合物对照物不易合成，但是依照中国药典中流动相方法的建立，可以借助以往抗生素的检测经验，进行头孢羟氨苄高分子聚合物的检测与验证。本次验证中以磷酸盐和水为流动相缓冲液，以头孢拉定为对照品，通过凝胶色谱法进行进样峰值面积的分析，并确定校正因子测得验证数据。下面就具体的实验材料、实验仪器和测定方法等进行了分子，并总结了头孢羟氨苄高分子聚合物的验证结果。
关键词：头孢羟氨苄；高分子聚合物；检查方法；实验操作；结果分析
在消炎和抗感染治理的病症用药中，头孢羟氨苄高分子聚合物具有显著的治疗功效，特别是对葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎链球菌等具有明显的抑制作用。在泌尿道感染、呼吸道感染等临床试验中具有明显的缓解病情的功效，其治愈的速度也明显高于其他的消炎药物的治疗。在抗生素的药物使用中，不同的药物控制量会对机体产生不同的生理影响，在依据中国药典的试验方法中，较多的抗生素药物已经进行了高分子聚合物含量的对比分析，根据相关实验方法的借鉴，对头孢羟氨苄高分子聚合物进行了可行性的检测。
一、实验材料
1、仪器
P-230高压恒流泵、UV230 + 紫外可见检测器；EC2000色谱工作站；色谱柱：Sephadex G-10 50～60μm，10.0mm×300mm。
2、试剂
蓝色葡聚糖2000（Pharmacia公司）；头孢羟氨苄对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0431-9501，含量95.0%）；头孢拉定对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130427-200306，含量91.8%）；头孢羟氨苄原料（昂立康贈送，批号：080501、080502、080503）；其余试剂均为分析纯。
二、方法和结果
1、色谱条件与系统适用性实验
用葡聚糖凝胶G-10（50～60μm）为填充剂，不锈钢柱内径1.0cm，柱高度30cm，以pH7.0的磷酸盐缓冲液[0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-0.2mol/L磷酸二氢钠（95：5）]为流动相A，以水为流动相B，流速为0.6mL/min，检测波长为254nm。
分别以A、B为流动相，取0.1mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液200μL，注入色谱仪，理论板数以蓝色葡聚糖2000峰计均不低于700，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200μL，连续进样5次，峰面积的RSD不应大于5.0%。
对照溶液的制备。取头孢拉定对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含10μg的溶液。
测定法。取供试品约0.2g，精密称定，置10mL量瓶中，加2%碳酸钠溶液4mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，立即精密量取200μL注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另精密量取对照溶液200μL注入液相色谱仪，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，含头孢羟氨苄聚合物以头孢羟氨苄计，不得过0.05%（头孢羟氨苄：头孢拉定=1：1）。
2、对照品的选择和校正因子的测定
分别考察了头孢羟氨苄对照品溶液（10μg/mL）在流动相B的3种系统：水（流速0.6mL/min）、0.01%十二烷基硫酸钠水溶液（流速1.0mL/min）、0.01%甘氨酸水溶液（流速1.0mL/min）中峰面积的稳定性，结果发现，三种系统中峰面积均逐渐减小，5针峰面积RSD>5%，拖尾因子逐渐变大，并大于2.0，
3、最低检测限和定量限
在流动相A中，取供试品稀释至4μg/mL时，测得响应值为噪音的3倍，故本法的最低检测限为4μg/mL；取供试品稀释至8μg/mL时，测得响应值为噪音的5倍，故本法的最低定量限为8μg/mL。
4、线性与范围
精密称取头孢拉定对照11.24mg，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置于10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。进样测定，峰面积与浓度关系如下，线性回归方程为y=366.7x+77.85（r 2 =0.9992），结果表明，对照在1-12μg/mL范围内线性良好。
5、聚合物控制限度的制定
依法检查头孢羟氨苄3批（批号分别为080501、080502、080503）样品的聚合物含量，结果分别为0.0032%、0.0074%和0.0026%，故建议控制限度定为0.05%，该限度是注射用头孢的限度，因此可以用于供口服使用的本品的质量控制。
三、结果分析
高分子聚合物的药品检测在国内还处于发展阶段，但是在实际的应用中也具有科学的认定和使用成效。在参照国内的高分子聚合物的药典分析中，通过两种流动相液体的转换，实现目标检测。由于高分子聚合物对照物难以制备，需要通过药品的自身的参照来完成实验，并在两种流动相的共同作用中，分析小分子和大分子状态下通过凝胶色谱柱，在分离和缔合的实验测定中，对吸收峰值的图像进行分析。
选择适合的对照品。在测定头孢羟氨苄高分子聚合物的用量控制中，需要对对照品进行选择。在参照中国药典中的对照品要点分析，并对以往的抗生素高分子聚合物进行分析，确定了在不同的缔合状态中检测对照，以及由于结构原因导致了进样峰面积减少的对照分析。经过对相关文献的翻阅，以及对头孢羟氨苄高分子聚合物在水、甘氨酸等对照进样的峰面积对比分析可知，其药物特性与阿西匹林相似，查阅阿西匹林在药品检测中的实验对照品，并作为头孢羟氨苄高分子聚合物的对照品使用，并确定校正因子，实现此种高分子聚合物抗生素的检查。
中国药典所载β-内酰胺抗生素高聚物检测中供试品浓度均为20mg/mL，分别采用水、0.1%十二烷基硫酸钠溶液和流动相A（pH7.0的磷酸盐缓冲液）作溶剂，均无法达到上述浓度；采用0.1mol/L盐酸可达到，但是峰形不佳；参考阿莫西林试验方法选择2%碳酸钠溶液溶解，结果峰形较好，高聚物与主峰分离良好。但是样品在碳酸钠溶液中不稳定，应当即配即用。
结语：在头孢羟氨苄高分子聚合物的检查方法中，通过流动相溶液的组成、对照品的选择和校正因子的确定等，再参照抗生素聚合物的检测结论，在中国药典的应用中确定了检查实验操作。通过方法学验证，建立了符合药品检验要求的头孢羟氨苄高分子聚合物的测定方法，并采用此方法对3批头孢羟氨苄进行了检验，验证了检测方法的可行性。
参考文献：
[1] 施晔.注射用头孢拉宗钠的高分子聚合物检查方法的建立与验证[J].国外医药（抗生素分册），2014（07）.
[2] 郭艳娟.注射用头孢美唑钠高分子聚合物检查方法的建立与验证[J].天津医药，2014（06）.
关键词：头孢羟氨苄；高分子聚合物；检查方法；实验操作；结果分析
在消炎和抗感染治理的病症用药中，头孢羟氨苄高分子聚合物具有显著的治疗功效，特别是对葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎链球菌等具有明显的抑制作用。在泌尿道感染、呼吸道感染等临床试验中具有明显的缓解病情的功效，其治愈的速度也明显高于其他的消炎药物的治疗。在抗生素的药物使用中，不同的药物控制量会对机体产生不同的生理影响，在依据中国药典的试验方法中，较多的抗生素药物已经进行了高分子聚合物含量的对比分析，根据相关实验方法的借鉴，对头孢羟氨苄高分子聚合物进行了可行性的检测。
一、实验材料
1、仪器
P-230高压恒流泵、UV230 + 紫外可见检测器；EC2000色谱工作站；色谱柱：Sephadex G-10 50～60μm，10.0mm×300mm。
2、试剂
蓝色葡聚糖2000（Pharmacia公司）；头孢羟氨苄对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0431-9501，含量95.0%）；头孢拉定对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130427-200306，含量91.8%）；头孢羟氨苄原料（昂立康贈送，批号：080501、080502、080503）；其余试剂均为分析纯。
二、方法和结果
1、色谱条件与系统适用性实验
用葡聚糖凝胶G-10（50～60μm）为填充剂，不锈钢柱内径1.0cm，柱高度30cm，以pH7.0的磷酸盐缓冲液[0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-0.2mol/L磷酸二氢钠（95：5）]为流动相A，以水为流动相B，流速为0.6mL/min，检测波长为254nm。
分别以A、B为流动相，取0.1mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液200μL，注入色谱仪，理论板数以蓝色葡聚糖2000峰计均不低于700，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200μL，连续进样5次，峰面积的RSD不应大于5.0%。
对照溶液的制备。取头孢拉定对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含10μg的溶液。
测定法。取供试品约0.2g，精密称定，置10mL量瓶中，加2%碳酸钠溶液4mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，立即精密量取200μL注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另精密量取对照溶液200μL注入液相色谱仪，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，含头孢羟氨苄聚合物以头孢羟氨苄计，不得过0.05%（头孢羟氨苄：头孢拉定=1：1）。
2、对照品的选择和校正因子的测定
分别考察了头孢羟氨苄对照品溶液（10μg/mL）在流动相B的3种系统：水（流速0.6mL/min）、0.01%十二烷基硫酸钠水溶液（流速1.0mL/min）、0.01%甘氨酸水溶液（流速1.0mL/min）中峰面积的稳定性，结果发现，三种系统中峰面积均逐渐减小，5针峰面积RSD>5%，拖尾因子逐渐变大，并大于2.0，
3、最低检测限和定量限
在流动相A中，取供试品稀释至4μg/mL时，测得响应值为噪音的3倍，故本法的最低检测限为4μg/mL；取供试品稀释至8μg/mL时，测得响应值为噪音的5倍，故本法的最低定量限为8μg/mL。
4、线性与范围
精密称取头孢拉定对照11.24mg，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置于10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。进样测定，峰面积与浓度关系如下，线性回归方程为y=366.7x+77.85（r 2 =0.9992），结果表明，对照在1-12μg/mL范围内线性良好。
5、聚合物控制限度的制定
依法检查头孢羟氨苄3批（批号分别为080501、080502、080503）样品的聚合物含量，结果分别为0.0032%、0.0074%和0.0026%，故建议控制限度定为0.05%，该限度是注射用头孢的限度，因此可以用于供口服使用的本品的质量控制。
三、结果分析
高分子聚合物的药品检测在国内还处于发展阶段，但是在实际的应用中也具有科学的认定和使用成效。在参照国内的高分子聚合物的药典分析中，通过两种流动相液体的转换，实现目标检测。由于高分子聚合物对照物难以制备，需要通过药品的自身的参照来完成实验，并在两种流动相的共同作用中，分析小分子和大分子状态下通过凝胶色谱柱，在分离和缔合的实验测定中，对吸收峰值的图像进行分析。
选择适合的对照品。在测定头孢羟氨苄高分子聚合物的用量控制中，需要对对照品进行选择。在参照中国药典中的对照品要点分析，并对以往的抗生素高分子聚合物进行分析，确定了在不同的缔合状态中检测对照，以及由于结构原因导致了进样峰面积减少的对照分析。经过对相关文献的翻阅，以及对头孢羟氨苄高分子聚合物在水、甘氨酸等对照进样的峰面积对比分析可知，其药物特性与阿西匹林相似，查阅阿西匹林在药品检测中的实验对照品，并作为头孢羟氨苄高分子聚合物的对照品使用，并确定校正因子，实现此种高分子聚合物抗生素的检查。
中国药典所载β-内酰胺抗生素高聚物检测中供试品浓度均为20mg/mL，分别采用水、0.1%十二烷基硫酸钠溶液和流动相A（pH7.0的磷酸盐缓冲液）作溶剂，均无法达到上述浓度；采用0.1mol/L盐酸可达到，但是峰形不佳；参考阿莫西林试验方法选择2%碳酸钠溶液溶解，结果峰形较好，高聚物与主峰分离良好。但是样品在碳酸钠溶液中不稳定，应当即配即用。
结语：在头孢羟氨苄高分子聚合物的检查方法中，通过流动相溶液的组成、对照品的选择和校正因子的确定等，再参照抗生素聚合物的检测结论，在中国药典的应用中确定了检查实验操作。通过方法学验证，建立了符合药品检验要求的头孢羟氨苄高分子聚合物的测定方法，并采用此方法对3批头孢羟氨苄进行了检验，验证了检测方法的可行性。
参考文献：
[1] 施晔.注射用头孢拉宗钠的高分子聚合物检查方法的建立与验证[J].国外医药（抗生素分册），2014（07）.
[2] 郭艳娟.注射用头孢美唑钠高分子聚合物检查方法的建立与验证[J].天津医药，2014（06）.