【摘 要】
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目的 牛分枝杆菌抗原MPB70 、MPB83 、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析.方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院
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目的 牛分枝杆菌抗原MPB70 、MPB83 、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析.方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段.采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE) 获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6.转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白.用Ni2 + 亲合层析法纯化该融合蛋白.结果经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性.Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应.热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白.结论融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景.
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