肝癌细胞的上皮间质转化(EMT)与其恶性行为密切相关。而肿瘤微环境对肿瘤细胞的EMT的调控尤为重要。探明肿瘤相关巨噬细胞(TAM)调控Hep3B肝癌细胞发生EMT的可能机制,为肝细胞癌(HCC)的临床研究和治疗提供新的方案。
方法将人白血病单核细胞系(THP-1)成功诱导为TAM。以TAM为靶细胞,分别用Hep3B肝癌细胞的上清液以及与Hep3B细胞共培养的形式干预,用蛋白质印迹法(Western blot)及RT-PCR方法检测TAM的Toll样受体(TLR)4表达变化。用质粒瞬时转染shRNA方法下调TAM的TLR4表达。以Hep3B肝癌细胞为靶细胞,分别用TAM上清液以及转染了shRNA TLR4质粒的TAM的上清液干预,用Western blot方法检测Hep3B肝癌细胞的E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达。两独立样本均数的比较采用双侧t检验。
结果THP-1细胞被成功诱导为TAM。Western blot结果显示,与对照组比较,TAM干预组(TAM-CM组)的Hep3B细胞E-cadherin蛋白表达降低、N-cadherin及Vimentin蛋白表达升高。当下调TAM的TLR4表达后,用其培养液干预Hep3B细胞,此时,Hep3B细胞的E-Cadherin表达量较TAM-CM组明显增加,而N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显减少。此外,Western blot及RT-PCR结果显示,TAM的TLR4受体表达水平受Hep3B肝癌细胞的影响。TAM组TLR4基因的表达高于TAM+HCC-CM组,t = 6.321,P = 0.003 2,差异具有统计学意义;TAM+Co-HCC组的表达高于TAM+HCC-CM组,t = 3.189,P = 0.033 2,差异具有统计学意义。
结论TAM能促进肝癌细胞Hep3B的上皮间质转化。下调TAM的TLR4表达可削弱TAM对Hep3B肝癌细胞上皮间质转化的影响。表明TAM表面的TLR4受体是TAM与Hep3B肝癌细胞相互作用的关键分子。