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目的
通过构建长链非编码RNA(lncRNA)、microRNA(miRNA)、mRNA参与的竞争性内源RNA(ceRNA)网络,进一步探究lncRNA在非梗阻性无精子症(NOA)发生发展过程中的调控机制。
方法收集2017年6月至2018年6月南方医科大学南方医院生殖中心收治的无精子症患者的睾丸组织。本课题组前期使用NOA患者(试验组)和生精正常的梗阻性无精子症(OA)患者(对照组)的睾丸组织进行基因芯片检测,筛选出差异表达的lncRNA和mRNA。本研究采用在NOA患者中差异表达的lncRNA和mRNA构建NOA ceRNA调控网络,并通过GeneMANIA数据库对ceRNA中编码蛋白的mRNA进行蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络构建。然后,采用WebGestalt对PPI中编码蛋白的基因进行功能富集分析。最后,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和双荧光素酶报告基因试验进行验证。
结果NOA的ceRNA调控网络共包括21个节点和26条边,其中4个lncRNA节点,13个miRNA节点以及4个mRNA节点。PPI网络分析发现有19个蛋白与ceRNA网络中mRNA编码蛋白有相互作用。功能富集分析结果显示这些编码蛋白显著性富集于戊糖代谢相关的生物学功能和信号通路。进一步的试验验证,证实lncRNA ANXA2P3通过与miR-613和miR-206竞争性结合,进而抑制mRNA TKT的表达水平。
结论lncRNA通过ceRNA调控网络影响NOA的发生发展,为NOA的诊治提供了新靶点和治疗方案。