【摘 要】
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目的 构建IL-15与铜绿假单胞菌外毒素突变体(PEΔ293)的融合蛋白IL15-PEΔ293,并且对该融合毒素进行初步的体外活性测定. 方法将人IL-15基因片段与PEΔ293的基因按正确的阅读框架融合,定向克隆在pET16b表达载体T7启动子的下游,得到表达质粒pET-IL15-PEΔ293.从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2+-NTA亲和层析纯化出融合蛋白IL15-PEΔ293.以IL-15
【机 构】
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210009,南京,东南大学基础医学院发育生物学与遗传学系,210009,南京,东南大学基础医学院发育生物学与遗传学系
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目的 构建IL-15与铜绿假单胞菌外毒素突变体(PEΔ293)的融合蛋白IL15-PEΔ293,并且对该融合毒素进行初步的体外活性测定. 方法将人IL-15基因片段与PEΔ293的基因按正确的阅读框架融合,定向克隆在pET16b表达载体T7启动子的下游,得到表达质粒pET-IL15-PEΔ293.从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2+-NTA亲和层析纯化出融合蛋白IL15-PEΔ293.以IL-15受体(IL-15R)阳性红白血病细胞系K562、多药耐药细胞系K562/AO2以及IL-15R阴性细胞系Jurkat为靶细胞测定IL15-PEΔ293的生物活性. 结果限制性分析和测序鉴定证明融合蛋白IL15-PEΔ293表达质粒pET-IL15-PEΔ293构建正确.该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中成功表达了融合蛋白IL15-PEΔ293.利用Ni2+-NTA亲和层析从大肠杆菌菌体总蛋白中纯化出重组蛋白.该融合蛋白对IL-15R阳性细胞K562和K562/AO2有明显的剂量依赖的细胞毒作用,而对IL-15R阴性细胞Jurkat没有表现剂量依赖的细胞毒作用. 结论融合蛋白IL15-PEΔ293表达质粒构建成功,在大肠杆菌中表达纯化后的新型融合蛋白IL15-PEΔ293对IL-15R阳性细胞有良好的靶向杀伤活性。
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