【摘 要】
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目的:探究长链非编码RNA（lncRNA）NONHSAT069381对心肌细胞凋亡的影响及其相关作用机制。方法:通过基因芯片从健康老年和青年志愿者的血液中筛选出与衰老差异性表达的lncRNAs和miRNAs,并通过生物信息学分析确定NONHSAT069381、hsa-miR-124-5p及CASP3为研究对象。使用慢病毒构建NONHSAT069381过表达或敲低的AC16人心肌细胞系,并应用Wes
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科
【基金项目】
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国家自然科学基金（81771494）；
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目的:探究长链非编码RNA（lncRNA）NONHSAT069381对心肌细胞凋亡的影响及其相关作用机制。方法:通过基因芯片从健康老年和青年志愿者的血液中筛选出与衰老差异性表达的lncRNAs和miRNAs,并通过生物信息学分析确定NONHSAT069381、hsa-miR-124-5p及CASP3为研究对象。使用慢病毒构建NONHSAT069381过表达或敲低的AC16人心肌细胞系,并应用Western blot探究NONHSAT069381对Caspase-3表达的影响,TUNEL染色及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性检测评价lncRNA对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。双荧光素酶基因报告系统探究hsa-miR-124-5p与NONHSAT069381及CASP3之间的相互作用,并在AC16细胞中验证其作用机制。结果:芯片结果及RT-PCR证实NONHSAT069381及hsa-miR-124-5p在老年组中表达增加（P<0.05）。细胞功能实验结果表明过表达NONHSAT069381促进Caspase-3的表达显著上升（P<0.05）和缺氧复氧诱导的心肌细胞Caspase-3活性增加（P<0.05）及TUNEL阳性细胞数目增加（P<0.05）。双荧光素酶基因报告实验结果证实hsa-miR-124-5p能够分别与NONHSAT069381与CASP3的3’-UTR靶向结合,qRT-PCR和Western Blot结果显示过表达hsa-miR-124-5p后AC16细胞中Caspase-3表达水平下降（P<0.05）,且hsa-miR-124-5p的表达并不影响NONHSAT069381的表达水平。结论:lncRNA (NONHSAT069381通过发挥ceRNA的功能抑制hsa-miR-124-5p而增强Caspase-3表达从而促进影响心肌细胞凋亡。
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