探讨下调转录因子Oct4表达水平对MDA–MB–231乳腺癌干细胞生物学特性的影响及其意义。
方法应用无血清悬浮培养法从乳腺癌MDA–MB–231细胞中分离富集乳腺癌干细胞，流式细胞术检测CD44＋/CD24–/low细胞亚群的比例，小鼠皮下成瘤实验和紫杉醇抑制实验鉴定无血清悬浮培养法获得的MDA–MB–231乳腺癌干细胞，逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测MDA–MB–231乳腺癌干细胞中Oct4的表达情况，并利用小分子RNA干扰片段干扰Oct4的表达，干扰实验设空白对照组(不转染任何siRNA)、阴性对照组(转染对细胞无任何干扰作用的siRNA序列)和Oct4 siRNA组(转染对Oct4基因有干扰作用的siRNA序列)。分别利用四甲基偶氮唑蓝法、Transwell小室法和紫杉醇抑制实验，检测干扰Oct4表达后MDA–MB–231乳腺癌干细胞的增殖能力、侵袭能力和对化疗药物的耐药性。
结果MDA–MB–231乳腺癌干细胞以悬浮球的形式生长扩增，MDA–MB–231乳腺癌干细胞CD44＋/CD24–/low细胞亚群的比例(92.7%)高于MDA–MB–231乳腺癌细胞(76.6%，P<0.05)。接种0.2×107个/ml细胞数，MDA–MB–231乳腺癌干细胞肿瘤体积为(124.60±13.65)mm3，大于MDA–MB–231乳腺癌细胞形成的肿瘤体积[(68.20±9.99)mm3，P<0.01)]。紫杉醇对MDA–MB–231乳腺癌干细胞的半数抑制浓度(IC50)为(8.20±0.34)μg/ml，高于MDA–MB–231乳腺癌细胞[(4.40±0.48)μg/ml, P<0.01)]。MDA–MB–231乳腺癌干细胞Oct4的表达水平高于乳腺癌细胞(P<0.05)。下调Oct4蛋白的表达后，Oct4 siRNA组MDA–MB–231乳腺癌干细胞从第3天开始其增殖能力低于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05)。侵袭性实验结果显示，转染72 h后，与空白对照组和阴性对照组比较，Oct4 siRNA组MDA–MB–231乳腺癌干细胞穿膜数量为(46.52±2.58)个，少于空白对照组[(77.29±2.13)个]和阴性对照组[(79.67±3.85)个，均P<0.05]。紫杉醇对转染了Oct4 siRNA的MDA–MB–231乳腺癌干细胞的IC50为(4.48±0.22)μg/ml，大于空白对照组[IC50为(7.99±0.59)μg/ml]和阴性对照组[(IC50为(8.10±0.68)μg/ml)]，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论无血清悬浮培养法成功获得了MDA–MB–231乳腺癌干细胞，下调Oct4的表达可以降低乳腺癌干细胞的增殖能力、侵袭能力和对化疗药物的耐药性。