【摘 要】
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为建立一种快速检测猪群中盖他病毒的血清学检测方法,本研究以猪盖他病毒Cap基因的原核表达蛋白为包被抗原,羊抗猪IgG-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了猪盖他病毒IgG抗体间接ELISA检测方法.利用矩阵法对检测条件进行优化,最终确定Cap蛋白最佳包被浓度为2μg/mL,被检血清的最佳稀释倍数为100倍.试验结果表明,该方法特异性、敏感性、重复性良好;利用该方法和间接免疫荧光(IFA)同时对119份临床样品检测,结果显示两种检测方法的检测结果总符合率为97.5％.本研究建立的检测方法能够用于检测并评价
【机 构】
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河南农业大学动物医学院,郑州450002
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为建立一种快速检测猪群中盖他病毒的血清学检测方法,本研究以猪盖他病毒Cap基因的原核表达蛋白为包被抗原,羊抗猪IgG-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了猪盖他病毒IgG抗体间接ELISA检测方法.利用矩阵法对检测条件进行优化,最终确定Cap蛋白最佳包被浓度为2μg/mL,被检血清的最佳稀释倍数为100倍.试验结果表明,该方法特异性、敏感性、重复性良好;利用该方法和间接免疫荧光(IFA)同时对119份临床样品检测,结果显示两种检测方法的检测结果总符合率为97.5％.本研究建立的检测方法能够用于检测并评价血清中的GETV的特异性抗体的水平,在临床血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价方面具有广泛应用前景.
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以云南地区2个野生香蘑属真菌子实体(H和Z2)为试验材料,结合GenBank中数据,开展ITS序列研究,探讨该序列作为香蘑属真菌系统发育研究的可行性及传统分类与分子系统发育分析的异同.用PCR方法扩增了2个供试样品的rDNA ITS(含5.8S)序列并测序,与GenBank中已提交的香蘑属菌株的ITS序列进行比较,分析了云南不同地区2个供试样品ITS序列的一级结构与其RNA二级结构的变异规律.去除两端未对齐的区域后,2个样品与GeneBank中8条同源序列的ITS比对长度为632 bp,(G+C)含量41
建立一种能够快速检测动物源性食品中多种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争化学发光酶免疫法.用诺氟沙星(NOR)分子修饰后制备的完全抗原免疫小鼠,获得对10种氟喹诺酮类药物具有广谱特异性的单克隆抗体,采用二因子交叉试验确定包被原与酶标抗体的最佳稀释度,通过单因素试验优化最佳包被条件、封闭液种类、竞争反应时间,从而建立反应过程的最佳条件,并对方法的灵敏度、交叉反应率、精密度进行评价.结果表明:NOR-1-OVA包被浓度0.3μg/mL,酶标抗体的稀释倍数为1:8000时为最佳稀释浓度;4℃包被过夜,封闭液为1％BS
本研究根据鸭乙型肝炎病毒(DHBV)基因组C基因序列设计一对特异性引物,建立一种快速检测DHBV的SYBR Green荧光定量PCR方法.该方法在7.8×102 copies/μL～7.8×108 copies/μL模板量时,呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.999.利用该方法对来自山东不同地区的95份临床样品进行检测.结果显示,该方法特异性好,临床样品检测阳性率与常规PCR方法的符合率为97.9％,且灵敏度高于普通PCR约100倍.将该方法应用于DHBV感染雏鸭的动力学研究,结果表明,DHBV感染雏
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