【摘 要】
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将PCR扩增得到的瑞氏木霉纤维素内切酶Ⅲ（Endo-β-Ⅰ，4-glucanase，EGⅢ）基因片段插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）质粒pPIC9K中，构建了EGⅢ的分泌表达质粒pPIC9K-eg3，然后经线性
【基金项目】
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国家973项目(No.2003CB716000);国家自然科学基金项目(No.30370036);山东大学微生物技术国家重点实验室开放基金项目
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将PCR扩增得到的瑞氏木霉纤维素内切酶Ⅲ（Endo-β-Ⅰ，4-glucanase，EGⅢ）基因片段插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）质粒pPIC9K中，构建了EGⅢ的分泌表达质粒pPIC9K-eg3，然后经线性化后电转化导入P．pastoris GS115受体菌中。获得的阳性克隆经SDS-PAGE和酶活检测，证明工程菌株发酵上清液中含有表达的EGⅢ蛋白并具有纤维素内切酶酶活。通过荧光定量PCR确定了各菌株的拷贝数并对不同拷贝数范围的菌体生长和EGⅢ的表达做了比较。实验结果表明，低拷贝重
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