【摘 要】
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目的 构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型.方法 利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注
【机 构】
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上海实验动物研究中心,上海 201203模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203/同济大学生命科学与技术学院,上海 200092;模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,
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目的 构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型.方法 利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证Lag-3基因敲除小鼠体内Lag-3基因敲除效果;通过建立ConA诱导的肝损伤模型研究Lag-3基因在体内的功能.结果 PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的Lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(Lag-3-/-)经刀豆蛋白(ConA)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag-3阳性细胞.表型分析发现,Lag-3基因的缺失显著减少了ConA诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了ConA诱发的急性肝损伤情况.结论 成功构建Lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag-3缺失可以显著缓解ConA引发的肝损伤的发生.
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