用高通量二代测序方法(next generation sequencing, NGS)分析胆道闭锁(biliary atresia，BA)患儿外周血中循环miRNA的表达特征，为寻找新的疾病相关无创诊断标志物提供依据。
方法分别收集2013年1月至2014年5月到本中心就诊的29例BA(疾病组)，10例婴儿肝炎综合征、5例Citrin基因缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)、5例胆总管囊肿(疾病对照组)和29例健康对照(正常对照组)血浆样本。选取前期收集的疾病组和正常对照组样本各9例用于高通量测序，将两组儿童分别按性别和年龄匹配分为3组，将血浆样本按上述分组进行组内等比例混合，提取血浆混合池中的总RNA，以Illumina HiSeq 2000测序仪分析混合样品中的全部miRNA序列。组间差异比较采用t检验，靶基因预测软件TargetScan, miRanda和PITA对差异miRNA的功能进行预测；并以实时荧光定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR)对差异表达显著的miRNA进行验证。
结果本研究成功构建BA患儿循环miRNA表达谱；BA患儿组与正常对照组中有188个循环miRNA表达存在差异(P<0.05)，包括87个上调、101个下调，56个为新发现的miRNA，其余皆为数据库中的已知miRNA。表达差异大于2倍的miRNA有146个，77个上调、69个下调。其中，表达量高且为各样本组恒定表达的miRNA有8个，均为已知miRNA，包括上调的has-miR-122-5p、-100-5p、-432-5p，下调的has-miR-140-3p、-10b-5p、-26a-5p、-126-3p、-744-5p；功能预测显示，这8个差异miRNA与肝胆发育、肝纤维化、细胞凋亡等相关；RT-qPCR验证结果表明，BA组血浆hsa-miR-122-5p、-100-5p表达量显著高于正常对照，而hsa-miR-140-3p、-10b-5p、-126-3p显著低于正常对照组(均P<0.05)，与测序结果一致。
结论本研究结果全面展示了BA患儿外周血循环中miRNA的表达特征，其中一些差异性的miRNA有可能作为BA无创性诊断的候选标志物。