体外诱导沙眼衣原体持续性感染对宿主细胞凋亡的调控

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目的

探讨阿奇霉素诱导持续性感染下沙眼衣原体对Hela229细胞凋亡的调控作用。

方法

沙眼衣原体感染Hela229细胞22 h后,加入含0.08 mg/L阿奇霉素的DMEM培养液继续培养至感染48 h,构建持续性感染细胞模型,以不含阿奇霉素的DMEM培养液培养构建急性感染细胞模型。感染48 h后,去除阿奇霉素继续培养进行沙眼衣原体复活试验。免疫荧光和电镜检测技术验证持续性感染模型。将沙眼衣原体急性感染和持续性感染的Hela229细胞用星状孢子素处理4 h诱导凋亡后,用Hoechst 33258染色和膜联蛋白V-碘化丙锭流式细胞仪检测宿主细胞凋亡,以未感染Hela229细胞为对照。

结果

加入阿奇霉素后,沙眼衣原体感染的细胞内形成异形包涵体,其内为畸形网状体。去除阿奇霉素继续培养至96 h,沙眼衣原体包涵体内见具有感染性的原体。Hoechst染色显示,经星状孢子素诱导细胞凋亡,持续性感染的细胞染色质疏松,而无沙眼衣原体感染的细胞染色质浓缩。在感染24 h时诱导凋亡,持续性感染组和急性感染组细胞凋亡率分别为45.567% ± 2.631%和38.567% ± 1.701%,两者差异有统计学意义(t = 2.686,P = 0.028),持续性感染组与未感染组(69.800% ± 2.835%)差异有统计学意义(t = 8.187,P < 0.001)。在感染48 h时诱导凋亡,持续性感染和急性感染组细胞凋亡率分别为46.700% ± 5.257%和61.767% ± 1.815%,两者差异有统计学意义(t = 5.781,P < 0.001);持续性感染组与未感染组(68.667% ± 3.156%)差异有统计学意义(t = 7.421,P < 0.001)。

结论

阿奇霉素诱导沙眼衣原体持续性感染可调控宿主细胞凋亡,且作用持久至48 h。

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