目的 研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制,为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据.方法 培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期,加入YM155形成一系列浓度梯度:100、10、1、0.1、0 ng/ml,培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验,观察YM155对其生长抑制效应,计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50).加入YM155至培养瓶中使其药物浓度为1 ng/ml,培养24、48、72 h进行流式细胞术检测,膜联蛋白(Annexin)V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡情况.选取不加药的对照组和加YM155后24、48 h的实验组细胞抽提总RNA,然后进行反转录PCR(RT-PCR)检测48 h时抗凋亡基因bcl-2、bcl-xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量,检测24h时survivin mRNA的相对表达量.同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase-3蛋白的表达量.结果 YM155对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性,24、48、72 h的IC50分别为6.1、2.7、1.2ng/ml.用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加(17.3%±2.1%、35.7%±3.3%、54.6%±4.3%比2.1%±0.3%,均P<0.05);PCR结果显示YM155作用后24和48 h下调survivin基因mRNA的表达(0.72±0.02、0.56±0.01比1.00,均P<0.05),但bcl-2家族基因表达变化不显著(P>0.05).Western印迹检测发现随着时间的推移,survivin、caspase-3蛋白的表达逐渐减低,caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化,而活化的caspase-3表达逐渐增加.结论 YM155能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡,其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游caspase-3,从而切割DNA引发凋亡;bcl-2家族基因可能并未参与此过程。
YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探
【摘 要】
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目的 研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制,为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据.方法 培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期,加入YM155形成一系列浓度梯度:100、10、1、0.1、0 ng/ml,培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验,观察YM155对其生长抑制效应,计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50).加入
【机 构】
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浙江省宁波市第一医院检验科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2012年92期
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