目的 研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制,为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据.方法 培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期,加入YM155形成一系列浓度梯度:100、10、1、0.1、0 ng/ml,培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验,观察YM155对其生长抑制效应,计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50).加入YM155至培养瓶中使其药物浓度为1 ng/ml,培养24、48、72 h进行流式细胞术检测,膜联蛋白(Annexin)V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡情况.选取不加药的对照组和加YM155后24、48 h的实验组细胞抽提总RNA,然后进行反转录PCR(RT-PCR)检测48 h时抗凋亡基因bcl-2、bcl-xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量,检测24h时survivin mRNA的相对表达量.同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase-3蛋白的表达量.结果 YM155对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性,24、48、72 h的IC50分别为6.1、2.7、1.2ng/ml.用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加(17.3％±2.1％、35.7％±3.3％、54.6％±4.3％比2.1％±0.3％,均P＜0.05)；PCR结果显示YM155作用后24和48 h下调survivin基因mRNA的表达(0.72±0.02、0.56±0.01比1.00,均P＜0.05),但bcl-2家族基因表达变化不显著(P＞0.05).Western印迹检测发现随着时间的推移,survivin、caspase-3蛋白的表达逐渐减低,caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化,而活化的caspase-3表达逐渐增加.结论 YM155能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡,其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游caspase-3,从而切割DNA引发凋亡；bcl-2家族基因可能并未参与此过程。
YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探
【摘 要】
：
目的 研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制,为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据.方法 培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期,加入YM155形成一系列浓度梯度:100、10、1、0.1、0 ng/ml,培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验,观察YM155对其生长抑制效应,计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50).加入
【机 构】
：
浙江省宁波市第一医院检验科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济医院血液科,200065上海,同济大学附属同济
【出 处】
：
中华医学杂志
【发表日期】
：
2012年92期
论文部分内容阅读
其他文献
有病治病天经地义,爱美减肥无可非议,女性的要求也许更多一些,但是,方法要对,要讲科学,否则酿成恶果,遗憾终身。 健康报连续有文章报道因所谓“骨质增生”“椎间盘脱出”找
肿瘤想像疗法是运用大脑中的想像,以意识调动自身精神调节机制,提高机体免疫能力,杀灭肿瘤细胞的方法.想像疗法通常将自身的免疫机制想像为猎手的形像,而将治疗的癌症想像为
随着城市化的进程不断加快,学术界对城市生态安全的重视程度也日益增强.基础型和传统型城市生态安全理论完全围绕自然生态安全,鲜有从城市经济生态安全、城市社会生态安全角
在内丹修持中要能“跟着感觉走”,就必须明确,静功修炼中感觉的含义:这里讲的感觉,不是一般的因外界刺激物作用于感官而产生的内在感受,而是指在静坐修炼中,当进入虚极静笃
中外医学专家们根据临床资料认为,如果妇女长期在外阴部、在腿内侧、下腹部等处搽用爽身粉,可使卵巢癌的发病危险性增加4倍。
Chinese and foreign medical experts based
目的 探讨人增生性瘢痕与正常皮肤组织的微小RNA (miRNA)表达谱差异.方法 收集2010年11月至2011年5月南昌大学第一附属医院烧伤中心5例患者的增生性瘢痕及其邻近正常皮肤组织,采用Trizol法抽提总RNA,先用mirVanaTM miRNA分离试剂盒对其进行纯化,然后使用微小RNA标记和杂交试剂盒进行荧光标记及芯片杂交,利用Feature Extraction( v10.7)软件对杂
目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)基因有效转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的可行性.方法 构建pcDNA3.1-Shh真核表达质粒,酶切和测序鉴定.密度梯度离心-贴壁培养法获取Wistar大鼠BMSC,电击穿孔法将pcDNA3.1-Shh、pcDNA3.1(一)空质粒和pmaxGFP报告质粒转染进BMSC,48 h后Western印迹法检测Shh基因的表达情况.结果 酶切和测序结
2002年7月28日，第89届环法自行车赛圆满落下帷幕，美国车手阿姆斯特朗最终第四次夺得该项赛事的总冠军。在这次比赛中，人们再一次看到了这位战胜了癌症后重返赛场的伟大运动员在赛场上的英姿，同时，也不禁为他与疾病作斗争的毅力和勇气所折服。 阿姆斯特朗出生于1971年9月，1987年开始从事自行车运动，1991 年获得美国全国业余自行车赛冠军，1992年转为职业车手并夺得一次国际赛事的冠军。谁料，
目的 观察1α,25-二羟维生素D3(简称VitD3)抑制白介素1β (IL-1β)和干扰素γ(IFN-γ)诱导胰岛β细胞凋亡的作用及对胰岛素分泌功能的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将VitD3和IL-1β/IFN-γ作用于细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的生长增殖率、赫斯特荧光染色观察细胞凋亡形态变化、磷脂结合蛋白V/碘化丙啶双染色流式检测细胞凋亡率、酶联免疫分析检测葡萄糖刺激胰岛素