【摘 要】
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目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)基因有效转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的可行性.方法 构建pcDNA3.1-Shh真核表达质粒,酶切和测序鉴定.密度梯度离心-贴壁培养法获取Wistar大鼠BMSC,电击穿孔法将pcDNA3.1-Shh、pcDNA3.1(一)空质粒和pmaxGFP报告质粒转染进BMSC,48 h后Western印迹法检测Shh基因的表达情况.结果 酶切和测序结
【机 构】
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目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)基因有效转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的可行性.方法 构建pcDNA3.1-Shh真核表达质粒,酶切和测序鉴定.密度梯度离心-贴壁培养法获取Wistar大鼠BMSC,电击穿孔法将pcDNA3.1-Shh、pcDNA3.1(一)空质粒和pmaxGFP报告质粒转染进BMSC,48 h后Western印迹法检测Shh基因的表达情况.结果 酶切和测序结果证实pcDNA3.1-Shh正确性.转染48 h后,荧光显微镜可观察到绿色荧光蛋白(GFP)的表达,有40％以上的细胞发出绿色荧光.Western印迹法检测证实有Shh基因表达,而转染pcDNA3.1(一)空质粒的BBMSC未检测到表达.结论 重组真核表达质粒pcDNA3.1-Shh转染大鼠BMSC后能有效表达Shh基因,为进一步Shh基因与细胞联合治疗大鼠心肌缺血模型提供了实验依据。
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