【摘 要】
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目的探索WAF1-S基因在喉癌细胞内表达的作用,为喉癌的基因治疗提供理论依据.方法采用亚克隆技术,构建WAF1-S真核表达载体pcDNA3-WAF1-S.利用lipofectamine介导,将外源野生型W
【机 构】
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710038,西安,第四军医大学唐都医院武警陕西总队医院;
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目的探索WAF1-S基因在喉癌细胞内表达的作用,为喉癌的基因治疗提供理论依据.方法采用亚克隆技术,构建WAF1-S真核表达载体pcDNA3-WAF1-S.利用lipofectamine介导,将外源野生型WAF1-S基因导入喉癌细胞系Hep-2,筛选阳性克隆,采用打点杂交技术观察WAF1-S基因mRNA在喉癌细胞中的表达,用Western blot及激光共聚焦方法定量分析WAF1-S基因的蛋白表达产物,MTT及流式细胞仪检测Hep-2细胞的生长状态.同时以空载体质粒pcDNA3为对照,分析WAF1基因对喉癌细胞生长的影响.结果打点杂交证实转染WAF1-S基因的Hep-2细胞有外源WAF1-S基因的表达,外源基因WAF1-S在Hep-2细胞系中的表达能抑制Hep-2细胞系的生长.转染后喉癌细胞中WAF1-S的蛋白表达明显高于对照组.流式细胞仪计数证实WAF1-S能诱导喉癌细胞系Hep-2发生凋亡并导致其发生G1期阻滞.结论导入外源野生型WAF1-S基因可抑制喉癌细胞生长.
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