【摘 要】
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为建立快速检测抗FMDV转基因猪中O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的荧光定量PCR方法,本试验选择FMDV结构蛋白基因3 D的核苷酸序列设计特异性引物,经过RNA
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,石河子大学生命科学学院
【基金项目】
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转基因生物新品种培育国家重大专项(2009ZX08005-003B)
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为建立快速检测抗FMDV转基因猪中O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的荧光定量PCR方法,本试验选择FMDV结构蛋白基因3 D的核苷酸序列设计特异性引物,经过RNA抽提、反转录成cDNA、PCR扩增,扩增出了大小为180bp的基因片段。将回收的目的片段与pMD18-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为FMDV的阳性重组质粒。将验证正确的重组质粒10倍梯度稀释后作模板,进行荧光定量PCR试验,建立FMDV 3 D基因的标准曲线及其回归方程,并确定扩增的最佳退火温度。试验结果显示标准曲线的回归方程为Y=-3.727X+32.04,回归系数R2=0.980,熔解曲线为单一峰。建立的荧光定量PCR方法的灵敏度为1.2×101拷贝/μL,只与FMDV反应。结果表明,建立的荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,为检测FMDV在动物组织细胞中的含量提供了技术方法。
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