【摘 要】
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目的:基于网络药理学及动物实验验证探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全的机制.方法:通过TCMSP数据库及文献检索收集补肾助孕方活性成分作用靶点,通过GeneCards、OMIM、DrugBank收集黄体功能不全相关基因靶点,利用Cytoscape软件构建“补肾助孕方-活性成分-潜在靶点”网络图,利用STRING数据库构建PPI网络,对疾病基因进行GO(Gene Ontology)/KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,参考课题组前期研究,选取凋亡相
【机 构】
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南京中医药大学附属医院,江苏 南京 210046
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目的:基于网络药理学及动物实验验证探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全的机制.方法:通过TCMSP数据库及文献检索收集补肾助孕方活性成分作用靶点,通过GeneCards、OMIM、DrugBank收集黄体功能不全相关基因靶点,利用Cytoscape软件构建“补肾助孕方-活性成分-潜在靶点”网络图,利用STRING数据库构建PPI网络,对疾病基因进行GO(Gene Ontology)/KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,参考课题组前期研究,选取凋亡相关信号通路,利用PyMol、AutoDock对中药活性成分及凋亡相关核心靶蛋白进行分子对接.使用免疫组化及PCR法对相关结果进行动物实验验证.结果:补肾助孕方筛选出232个潜在药物靶点,黄体功能不全筛选出3195个疾病靶点,映射后筛选出158个靶点.GO富集分析提示补肾助孕方可能通过促进细胞增殖、调控细胞凋亡、调控配体对雌二醇的反应等治疗LPD;KEGG通路分析显示,与PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、凋亡相关信号通路、p53信号通路及细胞周期等多条信号通路相关;分子对接结果显示,槲皮素、山柰酚等多种成分与凋亡信号通路关键蛋白均有较好的结合力;免疫组化结果表明,补肾助孕方各剂量组Bcl-2表达水平上调;补肾助孕方中剂量组Bax表达水平显著下调.PCR结果表明,补肾助孕方各剂量组Caspase-3 mRNA表达水平不同程度下调;补肾助孕方高剂量组Caspase-7 mRNA表达水平显著下调;补肾助孕方中、高剂量组Caspase-9 mRNA表达水平不同程度下调.结论:补肾助孕方可调节黄体功能不全模型大鼠卵巢组织细胞凋亡信号通路上多个靶蛋白表达,发挥治疗黄体功能不全作用.
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