人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定

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目的研究人纤溶酶原kringle区缺失突变体(PLGAK)的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达、产物纯化及理化性质鉴定。方法采用7.5L发酵罐对工程菌PLG△K/GS115进行高密度培养、甲醇诱导表达,培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥。等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测PLG△K等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403分别测定PLG△K激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性。结果7.5L高密度发酵可获得约为400mg/L培液的表达量,经三步纯化后制备的PLG△K
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