【摘 要】
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目的构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化。方法构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和
【机 构】
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内蒙古医科大学附属医院检验科,内蒙古医科大学附属医院神经外科
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目的构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化。方法构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定,转染载体到胶质瘤U251细胞株,将其分为U251组、PNC-U251组、PCyclinE-1-U251组、PCyclinE-2-U251组、PCyclinE-3-U251组、PCyclinE-4-U251组。通过RT-PCR的结果检测各组CyclinE mRNA的表达量,将干扰效果最好的一组用Transwell小室法检测侵袭能力的变化。结果成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4,而且CyclinE mRNA表达受到抑制,其中PCyclinE-1-U251组的穿膜细胞数为(45.4±2.7)个,U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数分别为(75.2±2.9)个和(74.4±3.5)个,U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较,差异无统计学意义(t=1.23,P=0.31),PCyclinE-1-U251组和U251组的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(t=15.00,P=0.00),PCyclinE-1-U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(t=13.81,P=0.00)。结论本实验构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,PCyclinE-1-U251细胞侵袭能力减弱。
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