【摘 要】
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探讨沙棘提取物对幽门螺杆菌脲酶(Helicobacter pylori urease,HPU)活性的抑制及相关基因的表达影响.培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)提取HPU,通过设置沙棘提取物系列浓度梯度及孵育时间梯度,采用Berthelot法检测HPU活性并评价沙棘提取物对HPU的抑制作用;进行酶活性动力学研究及对抑制位点进行分析;将菌液与不同浓度的沙棘提取物混合后孵育6 h,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative poly-merase chain
【机 构】
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青海大学 农牧学院,青海 西宁,810016;青海大学 农牧学院,青海 西宁,810016;青海大学 省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室,青海 西宁,810016;江苏省食品质量安全重点实验
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探讨沙棘提取物对幽门螺杆菌脲酶(Helicobacter pylori urease,HPU)活性的抑制及相关基因的表达影响.培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)提取HPU,通过设置沙棘提取物系列浓度梯度及孵育时间梯度,采用Berthelot法检测HPU活性并评价沙棘提取物对HPU的抑制作用;进行酶活性动力学研究及对抑制位点进行分析;将菌液与不同浓度的沙棘提取物混合后孵育6 h,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative poly-merase chain reaction,RT-qPCR)法检测菌体中脲酶蛋白 α 亚基(urease subunitα,Ure-α),脲酶蛋白 β 亚基(ure-ase subunitβ,Ure-β),脲酶辅助蛋白E(urease accessory protein E,Ure-E)和脲酶辅助蛋白H(urease accessory pro-tein H,Ure-H)脲酶基因的表达.结果表明,沙棘提取物对HPU的抑制作用呈时间、剂量依赖性,IC50值为(2.73±0.10)mg/mL.沙棘提取物对HPU的抑制类型为非竞争性抑制.巯基保护剂和Ni2+保护剂对HPU均无保护作用,而有协同沙棘提取物降低HPU活性的作用.沙棘提取物可降低HPU相关基因ure-α,ure-β,ure-E和ure-H的表达,对HPU具有良好的抑制效果.
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