【摘 要】
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目的 探讨高氧对早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞（typeⅡalveolar epithelial cells, AECⅡ）腺苷受体及其介导的环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate, cAMP）/蛋白激酶A（protein kinase A, PKA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB）信
【机 构】
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河南省人民医院郑州大学人民医院儿科
【基金项目】
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国家自然科学基金（U1804177）；
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目的 探讨高氧对早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞（typeⅡalveolar epithelial cells, AECⅡ）腺苷受体及其介导的环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate, cAMP）/蛋白激酶A（protein kinase A, PKA）/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB）信号通路的影响。方法 取早产SD大鼠肺组织分离培养原代AECⅡ,分为常氧组和高氧组，分别在氧气浓度21%和95%条件下培养。采用CCK-8法检测细胞培养6、12、24、48、72 h时AECⅡ增殖的光密度值。分别取培养12、24、48 h时2组原代AECⅡ,采用实时荧光定量PCR法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3蛋白及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量，采用ELISA法检测细胞cAMP水平。结果 培养6 h时，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值（0.69±0.01）与常氧组（0.68±0.02）比较差异无统计学意义（t=—0.698,P=0.520）;培养12、24、48、72 h时，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值（0.67±0.01、0.58±0.01、0.47±0.01、0.30±0.01）均低于常氧组（0.71±0.02、0.76±0.01、0.97±0.01、1.26±0.02）（P<0.05）,随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值逐渐降低（P<0.05）;培养24、48 h时，高氧组原代AECⅡ细胞腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均低于常氧组（P<0.05）,A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均高于常氧组（P<0.05）;培养12、24、48 h时，随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均逐渐降低（P<0.05）,A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均逐渐增高（P<0.05）。培养12、24、48 h时，高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量均高于常氧组（P<0.05）,随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量逐渐增高（P<0.05）。结论 高氧呈时间依赖性抑制早产大鼠原代AECⅡ细胞增殖，通过调节腺苷受体表达，激活其下游cAMP/PKA/CREB信号通路参与高氧相关AECⅡ损伤。
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