【摘 要】
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目的 分离纯化重组蟹会属硫蛋白(MT)并探讨其抗氧化作用.方法 利用前期已构建的绒螯蟹重组质粒pET-GST-MT,大量诱导表达重组蛋白GST-MT,采用锌柱亲和层析和乙二胺四乙酸(EDTA)洗脱液分离纯化重组GST-MT,十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹进行重组GST-MT的分析鉴定.对10只新西兰大白兔耳缘静脉注射纯化后的重组GST-MT(3mg/
【机 构】
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510182,广州医学院实验动物中心,510182,广州医学院实验医学研究中心,510182,广州医学院实验医学研究中心,华南农业大学动物科学学院
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目的 分离纯化重组蟹会属硫蛋白(MT)并探讨其抗氧化作用.方法 利用前期已构建的绒螯蟹重组质粒pET-GST-MT,大量诱导表达重组蛋白GST-MT,采用锌柱亲和层析和乙二胺四乙酸(EDTA)洗脱液分离纯化重组GST-MT,十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹进行重组GST-MT的分析鉴定.对10只新西兰大白兔耳缘静脉注射纯化后的重组GST-MT(3mg/kg),分别于注射前和汁射后不同时间段(6 h、1、2、3 d和5 d)取血,测定血清中的谷胱甘肽(GSH)和内二醛(MDA)含最及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC).结果 EDTA洗脱液可完全洗脱重组蛋白,SDS-PAGE和Western免疫印迹均证实其为高纯度的含锌GST-MT.重组GST-MT注射后所有时相新西兰大白兔血清中MDA含量明显低于注射前,T-AOC活性显著增加(P<0.05),除注射后6 h之外,其余时间段GSH含量和GSH-Px、SOD活性变化无统计学意义(P>0.05).结论 锌柱亲和层析结合EDTA洗脱液可简化GST-MT的纯化步骤并提高其纯度.GST-MT在短期内可增强实验兔体内抗氧化酶活性。
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