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[摘要]目的探究脂联素mRNA在不同程度子痫前期患者中的表达水平，探讨其在子痫前期中的作用及相关性。方法研究对象选取2014年6月～2015年9月我院收治的62例子痫前期患者，其中轻度子痫30例，重度子痫32例，分别设为轻度组和重度组，选取同期的50例正常妊娠妇女作为对照组，检测各组受检者胎盘及外周血中的脂联素mRNA水平进行对比分析。结果重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.39±0.12）和（0.11±0.01），轻度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.67±0.15）和（0.46±0.09），对照组胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.81±0.23）和（0.50±0.04），重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平显著高于轻度组和对照组（P<0.05），轻度组和对照组之间则无显著差异无统计学意义（P>0.05）。结论脂联素的低表达可能与子痫前期的发病有所相关，且随着程度的增加水平显著降低，这种情况在胎盘和外周血中均有体现，可能是子痫前期病理生理过程的重要影响因素。
[关键词]子痫前期；脂联素；mRNA；表达
子痫前期是常见的妊娠期疾病之一，是影响孕妇及胎儿健康及生命安全的隐形杀手。目前临床尚未完全阐明子痫的发病机制，有学者认为血管内皮细胞功能紊乱是导致此类疾病发生的主要原因，血管内皮细胞的炎性反应、胰岛素抵抗作用和脂肪细胞脂解都参与了子痫前期的发生和发展。脂联素是脂肪细胞分泌的一种激素蛋白，其水平变化和血管内皮细胞功能有着明显的相关性。本研究采用实时荧光定量检验法（RT-PCR）对不同程度子痫前期患者胎盘和外周血中的脂联素mRNA水平进行了测定，以探究其在子痫前期中的作用及意义，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
研究对象选取2014年6月～2015年9月我院收治的62例子痫前期患者，诊断符合《妇产科学》中的相关诊断标准，排除原发性高血压、甲状腺功能亢进及糖尿病患者，排除输血史、免疫治疗史患者。其中轻度子痫30例，重度子痫32例，分别设为轻度组和重度组，选取同期的50例正常妊娠妇女作为对照组。轻度组年龄22～37岁，平均（27.4±2.9）岁，孕周38～42周，平均（39.2±0.6）周；重度组年龄21～37岁，平均（27.6±2.7）岁，孕周38～42周，平均（39.4±0.5）周；对照组年龄22～39岁，平均（28.1±2.5）岁，孕周38～41周，平均（39.4±0.6）周。三组患者在年龄、孕周等一般资料对比差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2方法
1.2.1标本采集待胎儿娩出后在无菌状态下取脐根部胎盘母体面组织1.00cmx1.0cmx1.0cm大小，避开出血点及钙化点，用生理盐水冲洗干净后干燥，置于液氮中保存待用。且在分娩后第2天清晨取空腹肘静脉血5mL，于-80℃下保存待用。
1.2.2检验方法
取胎盘组织剪成小块研碎，加入Trizol试剂1mL研磨匀浆，按照标准RNA提取步骤进行操作。取血浆标本1mL，进行上述步骤操作提取RNA。采用逆转录试剂盒（PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis KitTaKaRa）分别进行cDNA提取，取2μL逆转录产物进行扩增，严格按照说明书步骤进行。反应体系以β-actin作内参照，脂联素引物序列为上游5’-AACATGCCCATFCGCqWFAC-3’、下游5’一TCTCCTFCCCCATACACCTG-3’，片段大小281bp。反应条件：94%条件下5min，94℃条件下30s，72℃条件下1min，72℃条件下10min，共进行35个循环。PCR反应产物取5μL在琼脂糖凝胶电泳，90V10min，70V 20min。在图像分析系统下观察并记录。
1.3统计学方法
采用SPSS19.0进行数据处理，多组间计量资料对比用方差检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.39±0.12）和（0.11±0.01），轻度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.67±0.15）和（0.46±0.09），对照组胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.81±0.23）和（0.50±0.04），重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平显著高于轻度组和对照组。见表1。
3讨论
脂联素是由脂肪细胞分泌的一种激素蛋白，最早由Scherer等发现并命名。近年来的研究显示，脂联素具有调控胰岛素、抗动脉粥样硬化和抗炎的作用，是目前唯一的一个负性调节脂肪细胞因子。脂联素能够加速脂肪和葡萄糖的分解，减轻胰岛素抵抗症状，促进肌肉对脂肪酸的吸收，降低游离脂肪酸的含量。脂联素对血管内皮细胞的保护作用主要是通过对炎性介质的抑制来实现的，有研究表明脂联素能够抑制血管中A型清道夫受体的表达，并增加血管舒张因子的生成，从而达到促进血管内皮修复的作用。
大量研究显示脂联素水平在糖尿病、心血管疾病、高脂血症以及代谢性综合征患者外周血中是降低的，而且脂联素水平的降低程度与病情成正相关。Kumada等采用ELISA法检测到子痫前期患者中的脂联素水平明显低于正常孕妇，而且重度子痫患者的脂联素水平下降明显，因此指出脂联素水平可能与子痫前期的发生发展有着密切的相关。Ouchi等采用免疫组化法进行检验，发现子痫前期患者的胎盘中也存在脂联素，而且大多分布在绒毛血管，因此认为脂联素对于胎盘绒毛血管的内皮损伤具有一定的修复作用。血管内皮细胞产生的舒张因子能够维持妊娠期的正常血管调节，而脂联素的水平则会影响舒张因子的合成，因此推测脂联素水平的改变可能是导致子痫前期发病的主要原因。但也有学者的研究显示部分子痫前期孕妇的脂联素水平出现升高，并指出可能与孕妇的肥胖、孕周有所相关。
从本研究数据来看，所有子痫前期患者的脂联素水平与对照组相比均有所降低，但轻度子痫前期患者的脂联素mRNA水平降低并不显著，与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。随着病情程度的增加，无论是在胎盘还是外周血中的脂联素水平均显著降低，重度组患者的脂联素mRNA水平显著低于对照组和轻度组，差异具有统计学意义（P<0.05），这说明脂联素水平表达下调可能导致血管内皮细胞功能紊乱，舒张因子合成降低，导致炎症反应增强，血管痉挛，进而引发子痫前期。
综上所述，脂联素的低表达可能与子痫前期的发病有所相关，且随着程度的增加水平显著降低，这种情况在胎盘和外周血中均有体现，可能是子痫前期病理生理过程的重要影响因素。
[关键词]子痫前期；脂联素；mRNA；表达
子痫前期是常见的妊娠期疾病之一，是影响孕妇及胎儿健康及生命安全的隐形杀手。目前临床尚未完全阐明子痫的发病机制，有学者认为血管内皮细胞功能紊乱是导致此类疾病发生的主要原因，血管内皮细胞的炎性反应、胰岛素抵抗作用和脂肪细胞脂解都参与了子痫前期的发生和发展。脂联素是脂肪细胞分泌的一种激素蛋白，其水平变化和血管内皮细胞功能有着明显的相关性。本研究采用实时荧光定量检验法（RT-PCR）对不同程度子痫前期患者胎盘和外周血中的脂联素mRNA水平进行了测定，以探究其在子痫前期中的作用及意义，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
研究对象选取2014年6月～2015年9月我院收治的62例子痫前期患者，诊断符合《妇产科学》中的相关诊断标准，排除原发性高血压、甲状腺功能亢进及糖尿病患者，排除输血史、免疫治疗史患者。其中轻度子痫30例，重度子痫32例，分别设为轻度组和重度组，选取同期的50例正常妊娠妇女作为对照组。轻度组年龄22～37岁，平均（27.4±2.9）岁，孕周38～42周，平均（39.2±0.6）周；重度组年龄21～37岁，平均（27.6±2.7）岁，孕周38～42周，平均（39.4±0.5）周；对照组年龄22～39岁，平均（28.1±2.5）岁，孕周38～41周，平均（39.4±0.6）周。三组患者在年龄、孕周等一般资料对比差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2方法
1.2.1标本采集待胎儿娩出后在无菌状态下取脐根部胎盘母体面组织1.00cmx1.0cmx1.0cm大小，避开出血点及钙化点，用生理盐水冲洗干净后干燥，置于液氮中保存待用。且在分娩后第2天清晨取空腹肘静脉血5mL，于-80℃下保存待用。
1.2.2检验方法
取胎盘组织剪成小块研碎，加入Trizol试剂1mL研磨匀浆，按照标准RNA提取步骤进行操作。取血浆标本1mL，进行上述步骤操作提取RNA。采用逆转录试剂盒（PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis KitTaKaRa）分别进行cDNA提取，取2μL逆转录产物进行扩增，严格按照说明书步骤进行。反应体系以β-actin作内参照，脂联素引物序列为上游5’-AACATGCCCATFCGCqWFAC-3’、下游5’一TCTCCTFCCCCATACACCTG-3’，片段大小281bp。反应条件：94%条件下5min，94℃条件下30s，72℃条件下1min，72℃条件下10min，共进行35个循环。PCR反应产物取5μL在琼脂糖凝胶电泳，90V10min，70V 20min。在图像分析系统下观察并记录。
1.3统计学方法
采用SPSS19.0进行数据处理，多组间计量资料对比用方差检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.39±0.12）和（0.11±0.01），轻度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.67±0.15）和（0.46±0.09），对照组胎盘和外周血的脂联素mRNA水平分别为（0.81±0.23）和（0.50±0.04），重度组患者胎盘和外周血的脂联素mRNA水平显著高于轻度组和对照组。见表1。
3讨论
脂联素是由脂肪细胞分泌的一种激素蛋白，最早由Scherer等发现并命名。近年来的研究显示，脂联素具有调控胰岛素、抗动脉粥样硬化和抗炎的作用，是目前唯一的一个负性调节脂肪细胞因子。脂联素能够加速脂肪和葡萄糖的分解，减轻胰岛素抵抗症状，促进肌肉对脂肪酸的吸收，降低游离脂肪酸的含量。脂联素对血管内皮细胞的保护作用主要是通过对炎性介质的抑制来实现的，有研究表明脂联素能够抑制血管中A型清道夫受体的表达，并增加血管舒张因子的生成，从而达到促进血管内皮修复的作用。
大量研究显示脂联素水平在糖尿病、心血管疾病、高脂血症以及代谢性综合征患者外周血中是降低的，而且脂联素水平的降低程度与病情成正相关。Kumada等采用ELISA法检测到子痫前期患者中的脂联素水平明显低于正常孕妇，而且重度子痫患者的脂联素水平下降明显，因此指出脂联素水平可能与子痫前期的发生发展有着密切的相关。Ouchi等采用免疫组化法进行检验，发现子痫前期患者的胎盘中也存在脂联素，而且大多分布在绒毛血管，因此认为脂联素对于胎盘绒毛血管的内皮损伤具有一定的修复作用。血管内皮细胞产生的舒张因子能够维持妊娠期的正常血管调节，而脂联素的水平则会影响舒张因子的合成，因此推测脂联素水平的改变可能是导致子痫前期发病的主要原因。但也有学者的研究显示部分子痫前期孕妇的脂联素水平出现升高，并指出可能与孕妇的肥胖、孕周有所相关。
从本研究数据来看，所有子痫前期患者的脂联素水平与对照组相比均有所降低，但轻度子痫前期患者的脂联素mRNA水平降低并不显著，与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。随着病情程度的增加，无论是在胎盘还是外周血中的脂联素水平均显著降低，重度组患者的脂联素mRNA水平显著低于对照组和轻度组，差异具有统计学意义（P<0.05），这说明脂联素水平表达下调可能导致血管内皮细胞功能紊乱，舒张因子合成降低，导致炎症反应增强，血管痉挛，进而引发子痫前期。
综上所述，脂联素的低表达可能与子痫前期的发病有所相关，且随着程度的增加水平显著降低，这种情况在胎盘和外周血中均有体现，可能是子痫前期病理生理过程的重要影响因素。