建立嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型,探讨嗜酸粒细胞激活对气道反应性的影响。
方法无特定病原体级雌性BALB/c小鼠60只,按随机数字表法分为多黏菌素B组、生理盐水组、多黏菌素B+N-甲酰-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP)组、生理盐水+fMLP组。各组小鼠给予对应的点鼻液点鼻,共21 d。其中多黏菌素B组和生理盐水组分别以12 μl的0.5%多黏菌素B和等量生理盐水点鼻,1次/d;多黏菌素B+fMLP组、生理盐水+fMLP组除以上对应处理外,分别于第21天点鼻后3 h再予10 μl fMLP(0.05 mg/ml,溶于乙酸中)点鼻1次。末次点鼻后24 h内搜集4组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数。多黏菌素B组、生理盐水组均于末次点鼻后3 h测定小鼠对乙酰甲胆碱(Ach)的气道反应性(吸气阻力、呼气阻力和肺顺应性);多黏菌素B+fMLP组、生理盐水+fMLP组均于末次点鼻后24 h测定气道反应性。酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清、BALF、肺组织匀浆中嗜酸粒细胞过氧化物酶(EPX)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)水平。肺组织HE染色、变色酸2R染色观察气道周围炎症细胞浸润程度,并在电镜下观察低密度嗜酸粒细胞形态。
结果多黏菌素B组BALF细胞总数显著高于生理盐水组[29.50(3.25)×104/ml比15.25(2.25)×104/ml,P<0.001],以嗜酸粒细胞最明显[11.76(6.02)×104/ml比0.12(1.08)×104/ml,P<0.001];两组小鼠吸气阻力、呼气阻力和肺顺应性差异均无统计学意义。随着注射Ach浓度的逐渐升高,多黏菌素B+fMLP组吸气阻力、呼气阻力均显著高于其他3组,肺顺应性均显著低于其他3组,血清、BALF、肺组织中EPX、ECP、ECF水平均显著高于其他3组(均P<0.001)。多黏菌素B、多黏菌素B+fMLP组肺组织气道周围嗜酸粒细胞明显增多;多黏菌素B组偶见脱颗粒后形成的空泡而成为低密度嗜酸粒细胞,多黏菌素B+fMLP组见较多激活的低密度嗜酸粒细胞。
结论应用多黏菌素B点鼻可建立嗜酸粒细胞性支气管炎小鼠模型;嗜酸粒细胞激活对气道高反应性的发生有重要作用。