【摘 要】
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目的构建PIAS-NY-pET30a原核表达载体,并诱导其成功表达,经纯化后获得高浓度的可溶性融合蛋白His-PIAS-NY,免疫小鼠获得鼠源性PIAS-NY多克隆抗体。方法以人精原cDNA文库为模
【机 构】
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徐州医科大学人体解剖学教研室,扬州大学组胚教研室,徐州医科大学遗传学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金(No:81500977).
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目的构建PIAS-NY-pET30a原核表达载体,并诱导其成功表达,经纯化后获得高浓度的可溶性融合蛋白His-PIAS-NY,免疫小鼠获得鼠源性PIAS-NY多克隆抗体。方法以人精原cDNA文库为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增PIAS-NY开放阅读框,克隆到pET30a表达载体中,酶切、PCR鉴定构建重组质粒。测序完全正确后将质粒PIAS-NY-pET30a转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行大量扩增,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。超声、离心、His-Ni柱亲和层析纯化包涵体蛋
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