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摘要 以瑞香狼毒为原料，通过烘干、红外干燥及微波干燥3种方式将瑞香狼毒干燥至恒重，考察不同的干燥方式对瑞香狼毒总黄酮含量及抑菌活性的影响，结果表明，通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，烘干处理次之，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低。红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。
关键词 干燥方式；瑞香狼毒；总黄酮；提取；抑菌活性
中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）09-0282-02
Abstract The roots of Stellera chamaejasme L. were used as the raw materials to measure the effects of different drying methods（drying through the electric drum wind drying oven，infrared and microwave drying）on the flavonoids content and the antimicrobial activity. Results showed that the highest content of flavonoids was obtained via infrared drying，the next was the drying processing via the electric drum wind drying oven，and the lowest was the pretreatment via microwave drying. Additionally，the antimicrobial effect of the flavonoids on Escherichia coli. and Staphyloccocus aureus via infrared drying was stronger than that through the other two drying methods，suggested that stronger antimicrobial activity may be related to the higher flavonoids content obtained via the infrared drying pretreatment.
Key words drying methods；Stellera chamaejasme L.；flavonoids；extract；antimicrobial activity
瑞香狼毒又名断肠草、红狼毒，为瑞香科狼毒属多年生草本植物瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）的根。其味苦辛、有毒，具有逐水、破积、杀虫、止痛等功效[1]。研究发现，黄酮类化合物是瑞香狼毒的主要化学成分，包括双二氢黄酮、狼毒色原酮、二氢瑞香素乙、瑞香素乙和异狼毒素等[2-5]，在抗菌、抗病毒、抗癌、抗肿瘤、杀灭寄生虫及农业害虫等方面具有独特效能[6-13]。
中药的干燥方式对药材的质量有着直接的影响，《本草蒙荃》记载“凡药藏贮宜提防，倘阴干、暴干、烘干未尽其湿度，则蛀蚀霉垢朽烂不免为殃”。目前，从瑞香狼毒的根中提取黄酮类化合物一般采用将根置于干燥箱中烘干至恒重，或在阴凉处放置至完全干燥，有的则先将根阴干，然后再放入烘箱中烘干至材料发脆，因材料处理方式不同，导致黄酮类化合物的提取率也存在较大的差异。本研究旨在通过比较不同的干燥方式对瑞香狼毒总黄酮含量及抑菌活性的影响，筛选出一种合适的材料前处理方法，为提高总黄酮类化合物的提取效率提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与试剂。瑞香狼毒：安徽省亳州市珍益堂中药材有限公司；乙醇、亚硝酸钠和硝酸铝：分析纯，襄阳市盈达化工仪器有限公司。
1.1.2 仪器。紫外可见分光光度计：UV-2550型，日本岛津公司；红外水分快速测定仪：MS-70型，日本AND公司；电热干燥箱：上海博迅，GZX-9246MBE；中药切片机：永历DYQ888，瑞安市永历制药机械有限公司。
1.2 方法
1.2.1 瑞香狼毒根的烘干处理。将瑞香狼毒根在中药切片机上切成3 mm的切片，分别在电热鼓风干燥箱、红外水分快速测定仪及微波炉内烘干至恒重（其中电热鼓风干燥箱和红外水分快速测定仪的温度均设定为60 ℃），粉碎后，过60目筛，备用。
1.2.2 总黄酮类化合物的提取及含量测定。准确称取烘干至恒重的瑞香狼毒粉末样品100 g装入索氏提取器，依次加入石油醚和95 %乙醇各200 mL，分别回流24 h，减压浓缩得浸膏。取浸膏5 g，加入蒸馏水50 mL，在60 ℃水浴条件下加热2 h，冷却至室温，过滤后弃滤液，重复3次，溶剂挥干后得到总黄酮类化合物。
标准曲线的制作：精确称取烘干至恒重的芦丁标准品15 mg，用30 %乙醇溶解并定容至100 mL，浓度为0.15 mg/mL。准确移取标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，分别加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10 % Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，以零管为空白对照，以芦丁含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
样品的测定：称取待测样品5 mg，用30%乙醇定容定容至10 mL，取适宜体积的待测溶液，加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至10 mL，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，根据标准曲线求出样品中總黄酮类化合物的含量。 1.2.3 总黄酮类化合物抑菌活性测定。瑞香狼毒总黄酮类化合物的抑菌活性测定采用抑菌圈法[14]。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli.）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus. Frankland）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。
1.3 数据处理
所得数据用Excel 2003软件计算平均值和标准差，用Origin 8.0软件作图，并用SPSS 17.0分析不同处理之间的差异显著性（P<0.05）。
2 结果与分析
2.1 芦丁标准曲线
用芦丁做标准品绘制的标准曲线如图1所示，通过最小二乘法作线性回归可得方程：y=1.116 9x 0.028 8，R2=0.995 1。从图中可以看出，在0～0.6 mg范围内，溶液的吸光值与芦丁含量线性关系良好。
2.2 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响
不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响结果见图2，从图中可知，黄酮类化合物的含量在烘干、红外干燥和微波干燥条件下有显著差异，其中通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，为17.76 mg/g，烘干处理方式得到的黄酮类化合物低于红外干燥处理方式，为13.98 mg/g，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低，仅为11.17 mg/g。
2.3 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响
不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响可通过测定纸片周围形成的透明的抑菌圈直径获得，抑菌圈直径越大，表明药物对病原菌的抑制作用越强。从表1可以看出，不同干燥方式处理后提取的黄酮类化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑制效果强于大肠杆菌。3种干燥方式中，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。而通过3种干燥方式提取的黄酮类化合物对蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用在本试验中未检测出。
3 结论与讨论
药材的干燥方式对药材的品质有着重要的影响。本研究表明，因干燥方式不同，导致瑞香狼毒根中黄酮类化合物的含量存在较大的差异。通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，烘干处理次之，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低。本试验采用的红外干燥法是用直管卤素灯和独特设计的SRA（二次辐射辅助装置）辐射器来加热物料，经过预设时间逐步升温到设定温度，干燥速度快，而且提取的黄酮类化合物含量高，说明该干燥方式兼具保质特点。而药材在烘干方式处理下需2 d左右才达到恒重，速度慢且消耗能量，微波干燥虽然速度快，但温度较难控制，对药材品质的影响较大。以往研究表明，瑞香狼毒对人体常见病原细菌和真菌有较强的抑制作用[15-16]。因药材前处理方式不同，导致提取的化合物对病原菌的抑制效应产生差异，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。
4 参考文献
[1] 江苏新医学院中药大辞典：下册[M].上海：上海科学技术出版社，1997：1898.
[2] 黄文魁，张振杰.瑞香科狼毒中的双二氢黄酮—狼毒素（Chamae-jasmine）的结构[J].兰州大学学报，1977（4）：50-54.
[3] 冯宝民，裴月湖，韩冰.瑞香狼毒中的黃酮类化合物[J]. 中草药，2001， 32（1）：14-15.
[4] 刘欣，叶文才，车镇涛，等.瑞香狼毒中的双黄酮类化合物[J].中草药，2003，34（5）：993.
[5] 毕凌霄，廖蓉苏.不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量研究[J].时珍国医国药，2010，21（10）：2505-2507.
[6] 窦洪举，李锋，侯勇跃.狼毒及瑞香狼毒的研究进展[J].畜牧与饲料科学，2013，34（11）：43-47.
[7] 何郁芳，谢秀娟，王美英.狼毒的药理作用和化学成分研究进展[J].河南科技大学学报（医学版），2004，22（1）：79-80.
[8] 杨玉印，陆风翔.瑞香狼毒治疗恶性肿瘤54例[J].中西医结合杂志，1989，9（11）：683.
[9] 樊骏平，贾正平，谢景文，等.瑞香狼毒水体物抗肿瘤作用[J].内蒙古医学院学报，1996，18（2）：67-70.
[10] 王敏，贾正平，马骏.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用[J].中国中药杂志，2005，30（8）：603-606.
[11] 邢立强，赵建清，李旺，等.瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌Survivin表达的影响[J].时珍国医国药，2009，20（9）：2185-2186.
[12] 吕全，贾秀贞，梁军，等.狼毒根提取物的生物活性测定[J].林业科学研究，2004，17（4）：447-452.
[13] 刘文程，王臣.瑞香狼毒的化学成分、生物活性及应用研究进展[J].现代药物与临床，2010，21（5）：26.
[14] 邱高翔.杜仲雄花提取物抗氧化和抗菌活性评价[D].杨凌：西北农林科技大学，2013.
[15] 赵磊，杜娟，王有年.瑞香狼毒提取物对3种病原菌的离体抑菌活性[J].中国农学通报，2010，26（6）：250-252.
[16] 李文娟，龚晓霞，王泓，等.青藏高原有毒植物瑞香狼毒根抑菌活性初步研究[J].西北植物学报，2005，25（8）：1661-1664.
关键词 干燥方式；瑞香狼毒；总黄酮；提取；抑菌活性
中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）09-0282-02
Abstract The roots of Stellera chamaejasme L. were used as the raw materials to measure the effects of different drying methods（drying through the electric drum wind drying oven，infrared and microwave drying）on the flavonoids content and the antimicrobial activity. Results showed that the highest content of flavonoids was obtained via infrared drying，the next was the drying processing via the electric drum wind drying oven，and the lowest was the pretreatment via microwave drying. Additionally，the antimicrobial effect of the flavonoids on Escherichia coli. and Staphyloccocus aureus via infrared drying was stronger than that through the other two drying methods，suggested that stronger antimicrobial activity may be related to the higher flavonoids content obtained via the infrared drying pretreatment.
Key words drying methods；Stellera chamaejasme L.；flavonoids；extract；antimicrobial activity
瑞香狼毒又名断肠草、红狼毒，为瑞香科狼毒属多年生草本植物瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）的根。其味苦辛、有毒，具有逐水、破积、杀虫、止痛等功效[1]。研究发现，黄酮类化合物是瑞香狼毒的主要化学成分，包括双二氢黄酮、狼毒色原酮、二氢瑞香素乙、瑞香素乙和异狼毒素等[2-5]，在抗菌、抗病毒、抗癌、抗肿瘤、杀灭寄生虫及农业害虫等方面具有独特效能[6-13]。
中药的干燥方式对药材的质量有着直接的影响，《本草蒙荃》记载“凡药藏贮宜提防，倘阴干、暴干、烘干未尽其湿度，则蛀蚀霉垢朽烂不免为殃”。目前，从瑞香狼毒的根中提取黄酮类化合物一般采用将根置于干燥箱中烘干至恒重，或在阴凉处放置至完全干燥，有的则先将根阴干，然后再放入烘箱中烘干至材料发脆，因材料处理方式不同，导致黄酮类化合物的提取率也存在较大的差异。本研究旨在通过比较不同的干燥方式对瑞香狼毒总黄酮含量及抑菌活性的影响，筛选出一种合适的材料前处理方法，为提高总黄酮类化合物的提取效率提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与试剂。瑞香狼毒：安徽省亳州市珍益堂中药材有限公司；乙醇、亚硝酸钠和硝酸铝：分析纯，襄阳市盈达化工仪器有限公司。
1.1.2 仪器。紫外可见分光光度计：UV-2550型，日本岛津公司；红外水分快速测定仪：MS-70型，日本AND公司；电热干燥箱：上海博迅，GZX-9246MBE；中药切片机：永历DYQ888，瑞安市永历制药机械有限公司。
1.2 方法
1.2.1 瑞香狼毒根的烘干处理。将瑞香狼毒根在中药切片机上切成3 mm的切片，分别在电热鼓风干燥箱、红外水分快速测定仪及微波炉内烘干至恒重（其中电热鼓风干燥箱和红外水分快速测定仪的温度均设定为60 ℃），粉碎后，过60目筛，备用。
1.2.2 总黄酮类化合物的提取及含量测定。准确称取烘干至恒重的瑞香狼毒粉末样品100 g装入索氏提取器，依次加入石油醚和95 %乙醇各200 mL，分别回流24 h，减压浓缩得浸膏。取浸膏5 g，加入蒸馏水50 mL，在60 ℃水浴条件下加热2 h，冷却至室温，过滤后弃滤液，重复3次，溶剂挥干后得到总黄酮类化合物。
标准曲线的制作：精确称取烘干至恒重的芦丁标准品15 mg，用30 %乙醇溶解并定容至100 mL，浓度为0.15 mg/mL。准确移取标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，分别加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10 % Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，以零管为空白对照，以芦丁含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
样品的测定：称取待测样品5 mg，用30%乙醇定容定容至10 mL，取适宜体积的待测溶液，加入5 % NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置5 min。再加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min。加入1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用30%乙醇定容至10 mL，混匀后静置15 min，于510 nm处测定吸光度，根据标准曲线求出样品中總黄酮类化合物的含量。 1.2.3 总黄酮类化合物抑菌活性测定。瑞香狼毒总黄酮类化合物的抑菌活性测定采用抑菌圈法[14]。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli.）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus. Frankland）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。
1.3 数据处理
所得数据用Excel 2003软件计算平均值和标准差，用Origin 8.0软件作图，并用SPSS 17.0分析不同处理之间的差异显著性（P<0.05）。
2 结果与分析
2.1 芦丁标准曲线
用芦丁做标准品绘制的标准曲线如图1所示，通过最小二乘法作线性回归可得方程：y=1.116 9x 0.028 8，R2=0.995 1。从图中可以看出，在0～0.6 mg范围内，溶液的吸光值与芦丁含量线性关系良好。
2.2 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响
不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物含量的影响结果见图2，从图中可知，黄酮类化合物的含量在烘干、红外干燥和微波干燥条件下有显著差异，其中通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，为17.76 mg/g，烘干处理方式得到的黄酮类化合物低于红外干燥处理方式，为13.98 mg/g，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低，仅为11.17 mg/g。
2.3 不同干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响
不同的干燥方式对瑞香狼毒黄酮类化合物抑菌活性的影响可通过测定纸片周围形成的透明的抑菌圈直径获得，抑菌圈直径越大，表明药物对病原菌的抑制作用越强。从表1可以看出，不同干燥方式处理后提取的黄酮类化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑制效果强于大肠杆菌。3种干燥方式中，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。而通过3种干燥方式提取的黄酮类化合物对蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用在本试验中未检测出。
3 结论与讨论
药材的干燥方式对药材的品质有着重要的影响。本研究表明，因干燥方式不同，导致瑞香狼毒根中黄酮类化合物的含量存在较大的差异。通过红外干燥处理提取的黄酮类化合物含量最高，烘干处理次之，而通过微波干燥方式前处理提取的黄酮类化合物含量最低。本试验采用的红外干燥法是用直管卤素灯和独特设计的SRA（二次辐射辅助装置）辐射器来加热物料，经过预设时间逐步升温到设定温度，干燥速度快，而且提取的黄酮类化合物含量高，说明该干燥方式兼具保质特点。而药材在烘干方式处理下需2 d左右才达到恒重，速度慢且消耗能量，微波干燥虽然速度快，但温度较难控制，对药材品质的影响较大。以往研究表明，瑞香狼毒对人体常见病原细菌和真菌有较强的抑制作用[15-16]。因药材前处理方式不同，导致提取的化合物对病原菌的抑制效应产生差异，红外干燥处理后提取的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果强于其他2种方式，可能与红外干燥处理后得到的黄酮类化合物含量较高有关。
4 参考文献
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[6] 窦洪举，李锋，侯勇跃.狼毒及瑞香狼毒的研究进展[J].畜牧与饲料科学，2013，34（11）：43-47.
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[10] 王敏，贾正平，马骏.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用[J].中国中药杂志，2005，30（8）：603-606.
[11] 邢立强，赵建清，李旺，等.瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌Survivin表达的影响[J].时珍国医国药，2009，20（9）：2185-2186.
[12] 吕全，贾秀贞，梁军，等.狼毒根提取物的生物活性测定[J].林业科学研究，2004，17（4）：447-452.
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[15] 赵磊，杜娟，王有年.瑞香狼毒提取物对3种病原菌的离体抑菌活性[J].中国农学通报，2010，26（6）：250-252.
[16] 李文娟，龚晓霞，王泓，等.青藏高原有毒植物瑞香狼毒根抑菌活性初步研究[J].西北植物学报，2005，25（8）：1661-1664.