探究以MyD88为关键传导分子的TLR4下游炎症-凋亡信号通路在NEC发病过程中的作用机制。
方法采用SPF级，新生10日龄MyD88–/–幼鼠和相应的野生型幼鼠，共32只，分别按照数字表法随机分配进入NEC实验组或对照组；NEC实验组幼鼠置入自制新生保育箱内造模处理(每日人工配置鼠乳代用品喂养，5次/d；每次给予N2缺氧90 s后，快速充入O2复氧，再次置入4 ℃环境冷刺激10 min，3次/d，连续3 d；LPS 10mg/kg稀释于0.1 ml灭菌水中，去芯留置针头口腔插管灌胃，1次/d，连续3 d)；对照组继续与母鼠同笼，鼠乳喂养。实验结束后取材回肠末端肠管组织，HE染色法组织病理评分及液相芯片细胞因子TNFα及IL1β检测判断各组肠道NEC炎症程度。TUNEL方法检测各组小鼠肠道细胞的凋亡水平变化。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RTPCR)检测各组小肠组织内TLR4炎症凋亡通路中TRIF、IRF-3、NF-κb、Bax、Bcl-2、Caspases的mRNA表达情况。
结果与野生鼠NEC组相比，MyD88敲除鼠小肠炎症程度评分(1.63±0.52比2.75±0.46)、炎症效应分子NFκb表达(1.38±0.25比2.33±0.76)、促炎因子IL1β(465.57±81.59比863.58±198.28)、TNFα(5.41±0.83比6.48±1.15)水平明显降低；肠上皮细胞凋亡明显减少(4.44±0.47比9.75±1.00)，凋亡效应分子Caspases 8(2.03±0.20比4.06±0.44)、Caspases 9(1.02±0.08比1.93±0.09)、Caspases 3(1.87±0.28比6.75±1.12)和促凋亡基因Bax(1.15±0.25比2.40±0.42)表达降低(P<0.05)。MyD88非依赖通路中关键因子TRIF(1.85±0.38比1.4±0.19)和IRF3(2.01±0.41比1.53±0.38)表达上调(P<0.05)；抗凋亡基因Bcl2(1.18±0.31比1.10±0.20)表达无变化(P>0.05)。
结论①TLR4下游的MyD88NFκb信号通路是NEC发病过程中重要的炎症凋亡调控机制；① MyD88在NEC发生过程中介导了Caspase 8-外源性及Caspase 9-内源性凋亡信号通路的激活过程；② MyD88敲除后，MyD88依赖性信号通路被阻断，MyD88非依赖通路被激活，NEC炎症程度及肠上皮细胞凋亡明显降低。