【摘 要】
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酵母是一种重要的基因工程宿主菌,但是由于其细胞壁结构复杂牢固,普通的菌落PCR方法的成功率较低。为解决此问题,提供一种快速、简单、高效的酵母菌落PCR方法。该方法先利用
【基金项目】
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广东省科技计划(2012B020311005)
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酵母是一种重要的基因工程宿主菌,但是由于其细胞壁结构复杂牢固,普通的菌落PCR方法的成功率较低。为解决此问题,提供一种快速、简单、高效的酵母菌落PCR方法。该方法先利用溶壁酶溶解酵母细胞壁,然后利用热涨裂解细胞并进行PCR反应。此方法将酵母细胞裂解和PCR在同一个PCR管中完成。试验结果显示此方法能成功扩增目的基因且成功率高。将此方法应用于外源性内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)的酿酒酵母转化子筛选,经与基因组PCR比较,菌落PCR与基因组PCR结果一致。结果证明此方法具有良好的稳定性,适用于酿酒酵母转化子的快速筛选。
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