【摘 要】
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目的 利用“睡美人”(SB)转座系统构建可表达红色荧光蛋白和荧光素酶基因的黑色素瘤B16F10细胞系,建立可视化黑色素瘤动物模型.方法 从含荧光素酶Luc2的质粒中获取Luc2基因,用NcoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切后插入pSBbi-RP SB转座子系统.构建的重组pSBbi-Luc2-RP转座质粒与转座酶按照一定比例转染黑色素瘤细胞B16F10,利用荧光显微镜观察转染效率,经嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞系.利用活体成像系统可视化实时监测评价小鼠皮下成瘤模型.结果 利用SB转座系统成功构建黑色素瘤B16
【机 构】
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兰州大学第二医院血液科,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院肿瘤内科,甘肃兰州730030;兰州大学第二临床医学院,甘肃兰州730000;兰州大学第二医院消化疾病重点实验室,甘肃兰州730030
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目的 利用“睡美人”(SB)转座系统构建可表达红色荧光蛋白和荧光素酶基因的黑色素瘤B16F10细胞系,建立可视化黑色素瘤动物模型.方法 从含荧光素酶Luc2的质粒中获取Luc2基因,用NcoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切后插入pSBbi-RP SB转座子系统.构建的重组pSBbi-Luc2-RP转座质粒与转座酶按照一定比例转染黑色素瘤细胞B16F10,利用荧光显微镜观察转染效率,经嘌呤霉素筛选稳定转染的细胞系.利用活体成像系统可视化实时监测评价小鼠皮下成瘤模型.结果 利用SB转座系统成功构建黑色素瘤B16F10细胞系,24、48 h转染率分别达40％、70％,上述细胞系经皮下成瘤后1周活体动物成像系统可检测到肿瘤形成.结论 利用SB转座系统可快速建立可视化黑色素瘤细胞系,利用小动物活体成像系统可动态观察黑色素瘤动物模型中肿瘤生长情况.
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