【摘 要】
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本试验旨在通过探究不同浓度过氧化氢(H2O2)对小鼠卵巢颗粒细胞(MOGC)氧化应激损伤的影响,以构建MOGC氧化应激模型,并探究氧化应激损伤对沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路的影响.试验选用MOGC,采用单因素试验设计,分别用0(对照组)、100、200、400和800μmol/L H2O2处理24 h,测定细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)生成量、相关抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及凋亡相关基因表达.结果表明:1)与对照组相比,不同浓度H2O2组细胞活力均显著降低(P<0.05),
【机 构】
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四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,动物抗病营养与饲料农业农村部重点实验室,动物抗病营养四川省重点实验室,成都 611130
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本试验旨在通过探究不同浓度过氧化氢(H2O2)对小鼠卵巢颗粒细胞(MOGC)氧化应激损伤的影响,以构建MOGC氧化应激模型,并探究氧化应激损伤对沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路的影响.试验选用MOGC,采用单因素试验设计,分别用0(对照组)、100、200、400和800μmol/L H2O2处理24 h,测定细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)生成量、相关抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量以及凋亡相关基因表达.结果表明:1)与对照组相比,不同浓度H2O2组细胞活力均显著降低(P<0.05),当H2O2浓度大于200μmol/L并且作用时间超过24 h时,细胞活力低于50％.2)与对照组相比,不同浓度H2O2组细胞凋亡率显著提高(P<0.05).3)与对照组相比,200、400和800μmol/L H2O2组细胞内ROS生成量显著提高(P<0.05).4)与对照组相比,400μmol/L H2O2组细胞内超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05);400、800μmol/L H2O2组细胞内过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)活性和还原型谷胱甘肽含量显著降低(P<0.05),细胞内MDA含量显著提高(P<0.05);200μmol/L H2O2组细胞内GSH?Px活性显著降低(P<0.05),细胞内MDA含量显著提高(P<0.05).5)与对照组相比,800μmol/L H2O2组细胞中B细胞淋巴瘤-2相互作用的细胞死亡中介物(Bim)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase?3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase?9)mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),细胞中B细胞淋巴瘤-xL(Bcl?xL)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);400μmol/L H2O2组细胞中Caspase?3 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),细胞中Bcl?xL mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);此外,200、400和800μmol/L H2O2组细胞中SIRT1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),而细胞中叉头盒蛋白O1(FoxO1)、p53 mRNA相对表达量显著提高(P<0.05).结果提示,200μmol/L H2O2处理24 h为建立MOGC氧化应激模型的理想条件,并且SIRT1?FoxO1/p53通路参与了H2O2诱导的MOGC凋亡.
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