【摘 要】
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目的 观察应用Smad3特异性小分子干扰RNA(siRNA)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中对MMP-9表达的影响.方法化学合成Smad3 siRNA,并将其转染到MDA-MB-231细胞后行转化生长因子(TGF)-β(1μg/L)刺激.24 h后利用萤光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4xSBE)的活性;48 h后应用Western blot法测定Smad3、基质金属蛋白酶(MMP)-
【机 构】
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150086,哈尔滨医科大学附属第二医院普外科,150086,哈尔滨医科大学附属第二医院普外科,150086,哈尔滨医科大学附属第二医院普外科,150086,哈尔滨医科大学附属第二医院普外科,1500
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目的 观察应用Smad3特异性小分子干扰RNA(siRNA)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中对MMP-9表达的影响.方法化学合成Smad3 siRNA,并将其转染到MDA-MB-231细胞后行转化生长因子(TGF)-β(1μg/L)刺激.24 h后利用萤光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4xSBE)的活性;48 h后应用Western blot法测定Smad3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白水平表达;24 h后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察MMP-9 mRNA水平表达.结果 与对照组比较,Smad3 siRNA有意义地抑制Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2).Smad3 siRNA有意义地抑制TGF-β诱导的4xSBE活性(5.2±0.3比1.0±0.1;P＜0.05).Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2)与对照组比较TGF-β刺激组明显激活了MMP-9 mRNA和蛋白水平的表达(2.4±0.3比1.0±0.1和1.8±0.4比1.0±0.2),而Smad3 siRNA有意义地抑制了TGF-β激活的MMP-9mRNA和蛋白水平的高表达(1.3±0.2比2.4±0.3和1.1±0.2比1.8±0.4).结论构建的Smad3siRNA能够抑制MDA-MB-231细胞中TGF-β诱导的MMP-9的表达。
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