目的 MYCN基因高扩增是神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)预后的重要指标,其表达蛋白N-myc在NB发生发展中的意义尚存在争议.我们以MYCN基因高扩增NB细胞株SK-N-BE(2)为研究对象,探讨N-myc表达对细胞增殖、迁移的影响及可能机制.方法 设计构建MYCN siRNA;转染NB细胞株SK-N-BE(2),采用RT-PCR法和Western-blot法检测表达抑制情况；抑制N-myc表达后,用BrdU(colorimetric bromodeoxyuridine)试剂盒检测细胞增殖能力变化,Transwell(Costar)系统检测细胞迁移能力变化；Westem-blot法检验RACK1、Src、Akt、ERK1/2及P38表达和磷酸化改变.结果 对照组mRNA表达值(设为1),RT-PCR检测显示转染siRNA的SK-N-BE(2)细胞中N-myc mRNA表达(0.34±0.06)与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Western-blot检测结果显示,转染siRNA的SK-N-BE(2)细胞中N-myc蛋白表达(0.61±0.15)与对照组(1.97±0.26)比较显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).设定对照组迁移、增殖能力为1,N-myc表达降低后SK-N-BE(2)细胞的迁移能力(0.85±0.06)和增殖能力(0.68±0.05)均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).伴随细胞的增殖和迁移能力下降,出现RACK1(对照组1.46±0.18 vs N-myc RNAi组1.13±0.10)和磷酸化Src(Tye416)(对照组1.34±0.11 vs N-myc RNAi组0.72±0.23)表达降低,磷酸化Akt表达增加(对照组0.55±0.12 vs N-myc RNAi组0.84±0.15),差异有统计学意义(P＜0.05).磷酸化Src(Tye527),磷酸化ERK1/2、磷酸化p38的表达无显著变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在MYCN高扩增、高表达NB细胞株SK-N-BE(2)中N-myc表达下降可抑制肿瘤细胞增殖和迁移,其机制可能同RACK1、Src,Akt的表达或活化有关。
N-myc蛋白表达对神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞增殖迁移的影响
【摘 要】
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目的 MYCN基因高扩增是神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)预后的重要指标,其表达蛋白N-myc在NB发生发展中的意义尚存在争议.我们以MYCN基因高扩增NB细胞株SK-N-BE(2)为研究对象,探讨N-myc表达对细胞增殖、迁移的影响及可能机制.方法 设计构建MYCN siRNA;转染NB细胞株SK-N-BE(2),采用RT-PCR法和Western-blot法检测表达抑制情况；抑
【机 构】
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200092上海交通大学医学院附属新华医院小儿外科,200092上海交通大学医学院附属新华医院小儿外科,200092上海交通大学医学院附属新华医院小儿外科,200092上海交通大学医学院附属新华医院小
【出 处】
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中华小儿外科杂志
【发表日期】
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2013年34期
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